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标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

泡泡[使用道具]
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我配培养基时一般是按说明书要求加入碳酸氢钠后,将干粉溶于900毫升水中,然后分装、过滤,等使用时再加入血清和双抗并用少量盐酸调节Ph值,不知道这样有没有影响哎,不过我们一直都是这么干的。
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abc816[使用道具]
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我咨询过Hyclon公司,一般放时间长了的培养基会变碱,可以加HCL,但是HCL会影响细胞;另一个方法也是最简单的,就是把培养基的瓶盖旋松些放在培养箱里过会再拿出来就可以了。我试过一次,放了两个小时,颜色有点变浅。
咨询电话:010-80499033还有个免费的电话因为没有座机可用也没记住,可以向卖培养基的公司要他们的电话进行咨询
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阿敏[使用道具]
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我们也是用HCL调的~~~~~~~~~~
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BOSS2011[使用道具]
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把培养基的瓶盖旋松些放在培养箱里过会再拿出来就可以了。我试过一次,放了两个小时,颜色有点变浅。

==========================

这种方法我经常用。没什么问题。
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lixi559[使用道具]
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以上许多贴子说可以加入HCI调节,但不能加入太多,请问标准是多少 ,1mLHCL/L培养基多吗?
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乌贼老弟[使用道具]
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hepes是一种缓冲酸,再加入NaHCO3之后,培养基的缓冲能力比较强,有利于细胞生长吧!我自己已用过HCL调节pH值,培养基缓冲能力比较差,但细胞生长得还行。
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hold住[使用道具]
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回复 #36 乌贼老弟 的帖子

我的DMEM/F12确实是含有hepes的。主要是不想自己加,想着人家加的要比自己加的好。呵呵
cuturl('http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/support/Product-Technical-Resources/media_formulation.59.html')

COMPONENTS Molecular Weight Concentration (mg/L) mM
Amino Acids
Glycine 75 18.75 0.25
L-Alanine 89 4.45 0.05
L-Arginine hydrochloride 211 147.5 0.699
L-Asparagine-H2O 150 7.5 0.05
L-Aspartic acid 133 6.65 0.05
L-Cysteine hydrochloride-H2O 176 17.56 0.0998
L-Cystine 2HCl 313 31.29 0.1
L-Glutamic Acid 147 7.35 0.05
L-Glutamine 146 365 2.5
L-Histidine hydrochloride-H2O 210 31.48 0.15
L-Isoleucine 131 54.47 0.416
L-Leucine 131 59.05 0.451
L-Lysine hydrochloride 183 91.25 0.499
L-Methionine 149 17.24 0.116
L-Phenylalanine 165 35.48 0.215
L-Proline 115 17.25 0.15
L-Serine 105 26.25 0.25
L-Threonine 119 53.45 0.449
L-Tryptophan 204 9.02 0.0442
L-Tyrosine disodium salt dihydrate 261 55.79 0.214
L-Valine 117 52.85 0.452
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hold住[使用道具]
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Vitamins
Biotin 244 0.0035 0.0000143
Choline chloride 140 8.98 0.0641
D-Calcium pantothenate 477 2.24 0.0047
Folic Acid 441 2.65 0.00601
Niacinamide 122 2.02 0.0166
Pyridoxine hydrochloride 206 2.031 0.00986
Riboflavin 376 0.219 0.000582
Thiamine hydrochloride 337 2.17 0.00644
Vitamin B12 1355 0.68 0.000502
i-Inositol 180 12.6 0.07
Inorganic Salts
Calcium Chloride (CaCl2) (anhyd.) 111 116.6 1.05
Cupric sulfate (CuSO4-5H2O) 250 0.0013 0.0000052
Ferric Nitrate (Fe(NO3)3"9H2O) 404 0.05 0.000124
Ferric sulfate (FeSO4-7H2O) 278 0.417 0.0015
Magnesium Chloride (anhydrous) 95 28.64 0.301
Magnesium Sulfate (MgSO4) (anhyd.) 120 48.84 0.407
Potassium Chloride (KCl) 75 311.8 4.16
Sodium Chloride (NaCl) 58 6995.5 120.61
Sodium Phosphate dibasic (Na2HPO4) anhydrous 142 71.02 0.5
Sodium Phosphate monobasic (NaH2PO4-H2O) 138 62.5 0.453
Zinc sulfate (ZnSO4-7H2O) 288 0.432 0.0015
Other Components
D-Glucose (Dextrose) 180 3151 17.51
HEPES 238 3574.5 15.02
Hypoxanthine Na 159 2.39 0.015
Linoleic Acid 280 0.042 0.00015
Lipoic Acid 206 0.105 0.00051
Phenol Red 376.4 8.1 0.0215
Putrescine 2HCl 161 0.081 0.000503
Sodium Pyruvate 55 ∞
Thymidine 242 0.365 0.00151
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yes4[使用道具]
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我们一直是用HcL调的呢,每次差不多配制1L的DMEM培养基,这时候的PH大约是8.0左右,水是五蒸水高压的,然后再用过滤好的HCL调一下,到7。4就可以了。再用0。22的膜过滤除菌就完毕了,放4度保存。1L基本半个月就可以用完了。细胞状态不受影响。
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baidukk[使用道具]
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如果是自己用粉剂培养基配置,按规程加入NaHCO3,建议:1、添加10-20mM HEPES(很好的pH稳定试剂);2、配制后启用的培养基要尽快用完,因为溶于培养液中的CO2很容易因取用培养基后储存瓶中的非液体空间变大而逾出,造成NaHCO3/H2CO3缓冲对失衡而使培养基变碱。
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