细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
51
 
我觉得是可以的,不过要先把HCL稀释成一个当量的浓度,然后滴入培养基调PH值,我自己试过,是可行的,而且我是用来培养神经元细胞,养活了。要不你尝试一下?
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
52
 
补充一下,用稀释后的HCL调了PH值后再过滤就可以了
顶部
西子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74481
精华 0
积分 257
帖子 254
信誉分 100
可用分 2046
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
53
 
已有结论:目前用于培养基Ph值调节的主要有1N NaOH、1N HCl、NaHCO3和CO2,其中还有少部分战友在配培养基的时候加入了hepes,并且这些调节都是在培养基过滤之前调节的,

依然存在的问题:上述的调节方法都是在培养基过滤之前进行的,对于培养基过滤以后使用期间的ph调节很少有人讨论,只有111ading和唐朝风韵两位战友提到:配1N HCL灭菌后进行调整,但是这两位战友并没有讨论是如何灭菌1N HCL的,和灭菌后如何保存及保存时限。

下一步期待:期待大家讨论一下培养基过滤以后的ph调节所用的溶液的配制方法,除菌方法,除菌以后如何保存,保存条件,保存的期限。

比如:除菌方法的讨论,首先是否需要除菌,然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌,为什么,比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌,原因是强酸强碱里面细菌无法生长,但是也有人比如111ading战友说配1N HCL灭菌后进行调整,需要灭菌,那么到底需要不需要呢,请大家讨论?

再比如:ph调节液该如何保存,最多可以保存多少天,在什么条件下保存,是4度冰箱还是室温,请大家讨论?
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
54
 
我们配KNOCK OUT DMEM培养基也一直用盐酸+氢氧化钠调pH的,不过调之前加3.7g碳酸氢钠/L,按照说明书做的,一直以来细胞也很正常。我们的水是用hyclone的细胞培养级水,一般配完都偏碱,有时候我们为了省时间直接用浓盐酸调了,也还好,呵呵。
对了,想问各位群友一个问题,调好pH的培养基要过0.22微米的膜除菌,然后我们最后的完全培养基中需要加牛血清,是先把血清加进去再过滤,还是过滤完再加呢?还有个问题,如果加了血清再过滤,貌似非常难,有没有什么好的方法?
顶部
西子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74481
精华 0
积分 257
帖子 254
信誉分 100
可用分 2046
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
55
 

回复 #54 qqq111 的帖子

过滤后的培养基是无菌的;

血清是无菌的;

难道混合到一起就有菌了???!!!

所以,完全没有必要多此一举,费时费力不说,还容易出错,不过心理上好受一点。

此外,配好培养基以后的第一件事不是养细胞,而是检菌!!
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
56
 

回复 #55 西子 的帖子

其实我们每次过滤完都会检菌的。至于加血清再过滤,不是我本人,只是看到实验室有人那样做,非常的吃力,才顺便在这里问一下的。
我们配好的培养基一般都分装保存于4度冰箱,限两周内用完,使用前先预热。
顶部
铜雀[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76992
精华 0
积分 344
帖子 365
信誉分 101
可用分 2611
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-11
状态 离线
57
 
N NaOH的配制方法(500ml)

20gNaOH溶于蒸馏水中,加水稀释至500ml

1N HCL的配制方法(500ml)

41.6ml浓盐酸,加水稀释至500ml
分装后,室温保存。
一直用到完为止,也不知道能保存多长时间,
也没有注意能保存多久,反正是一直在用的 ,
顶部
西子[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74481
精华 0
积分 257
帖子 254
信誉分 100
可用分 2046
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
58
 

回复 #57 铜雀 的帖子

请问是在培养基过滤之前用来调ph,还是培养基过滤之后用来调ph呢????
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
59
 

tutu19820419 说的很有道理,NaHCO3可以和CO2够成一个缓冲体系,这样对维持PH值可能会更好!
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
60
 

我想从以下几个方面回答这个问题:

1、配制培养基PH值有一个原则,就是宁愿酸不要碱。

2、我配制DMEM培养基是这样调PH值的

用900ml左右的去离子水溶解干粉DMEM培养基,

加入 3.7g NaHCO3 搅拌溶解一至两个小时

这时候的培养基溶液PH值大致在8.6左右

3、直接加入浓盐酸1ml左右,这时候的PH值大至在6.6-6.8左右

4、定容至1000ml

5、过滤培养基,这时候的PH质在7.2左右,正好

不知大家注意到没有,过滤培养基会使得其PH值上调,

因此我在配培养基的时候故意在过滤之前将培养基的PH值配的偏酸一点,这样过滤后的PH值就

正好是所需要的范围。

大家看我只用了NaHCO3,和HCL ,没有用到NaOH.

此方法比较简单,百试不爽,你也可以试试看
顶部