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标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

园丁##[使用道具]
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发表于 2011-12-30 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我从不在过滤后调PH值，请大家注意，虽然有很多方法在过滤后调PH值，但是我不建议采用

毕竟过滤后我的培养基就马上要分装的，保持的是无菌状态，一个过滤好的无菌状态的培养基

为什么还要被折腾来再去配PH值呢，所以原则上过滤后不应该去调PH值。一切都要在过滤前解

决。
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园丁##[使用道具]
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发表于 2011-12-30 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

补充一点，我的DMEM培养基是放在负20度保存的，效果不错，两个月内解冻没有问题，请问大

如过两个月还用不完1L培养基，那你的细胞怎么在养就不好说了，呵呵
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发表于 2011-12-30 15:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们一直用5N的HCL450ul调PH值即可，也可用CO2来调，但必须的有经验,而且使用时很容易变碱，
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发表于 2011-12-30 15:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室的看法是：HCL肯定是不能高温灭菌，因为超过了HCL沸点后就会挥发，如果高温灭菌后，就成为水了。我们实验室一般为两种，做的稍微粗一点的就直接拿纯盐酸对灭菌水配，如果细致一点的可以配完用可回收的小滤器滤一下。一般最好保存在4度，可以稍微长一点，我们一般是配了几个人一起用，一两个月内没有问题。希望大家一起探讨。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2011-12-30 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的培养基配置后给细胞使用后，第二天就边黄了，我不知道1640里面有没有酚红指示剂
别人都不是用1640养的，都是用DMEM。他们的比我红很多
我调了PH值，7左右，但是依然第二天培养液就变黄了。
配方：1640：胎牛血清 9:1
外加三种因子和双抗：胰岛素，胰岛素样生长因子，表皮生长因子，还有青链霉素。
1640过滤后再加入三种因子和双抗。
配置完毕后红色就比较淡了。测PH值，在7附近，偏碱一点。
但是细胞培养时，换液，过夜后培养瓶中液体完全变黄，完全变黄。彻底的黄色，很多师兄师姐说太酸了，PH值没有调好，我就彻底晕菜了？
到底怎么搞啊，细胞倒是能活，我每天换液。
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发表于 2011-12-30 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #65 milkdog 的帖子

细胞的状态如何，只要状态好，就不用管它吧。
此外，培养基变黄，是否浑浊，如果浑浊，怀疑污染。如果不浑浊，则1细胞量的多少，量太大代谢多，肯定要变黄；2ph值的问题，偏酸了。
关于ph值，你配制以后测的值是用试纸测的，还是ph计啊，建议ph计。
还有一点经验：变黄，如果是触目惊心的黄，那么一般都浑浊了，就是污染了
good luck！多思考
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发表于 2011-12-30 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.请问你们的HCL和NaHCO3是如何进行无菌处理的。谢谢
2.根据我看的资料，好像hepes的缓冲能力很强，但是没有见过配好后的培养基用hepes调ph值的。呵呵，我有很多的hepes，不知道如何使用，除了配培养基的时候用那么一点点，甚至现在培养基里已经添加有了hepes，真的不知道该如何充分利用hepes。

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灭菌我们直接高压，但盐酸浓度不能过高，会挥发。我们养的细胞是直接用HCl调pH的
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milkdog[使用道具]
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发表于 2011-12-30 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #66 西子 的帖子

是触目惊心的黄，但是，镜下细胞活着，贴壁良好，生长良好，培养瓶对光，挺清亮，有师兄说支原体感染看不出，请教下，怎么解决。我没有PH计，只有试纸
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发表于 2011-12-30 15:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

镜下也没发现什么别的生物，就是细胞，还有些死亡的上浮的，下面贴壁百分之70%要传代了。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2011-12-30 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

比如：除菌方法的讨论，首先是否需要除菌，然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌，为什么，比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌，原因是强酸强碱里面细菌无法生长

支持不用灭菌，要是这也得灭菌，那酒精是不是也需要灭一下菌啊，这玩意应该能杀菌的，不用灭吧。
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