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标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

ha111[使用道具]
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我们实验室情况:
粉末配成1000毫升培养基,除袋上标明加3.7g Na2CO3(DMEM高糖粉末), 5% CO2 环境下对应Na2CO3 1.2~2g是比较好的缓冲环境,我们一般会加hepes浓度15~20mM,在外面操作较久培养基颜色不会那么快变碱
另外,配置过程中,加碳酸氢钠和hepes 后用NaOH调节至7.4左右后再定容,过滤后上升~0.2个pH,分装90ml/瓶,要用之前10ml血清又稍变酸,颜色看起来很不错。
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fsdd817[使用道具]
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一般情况下,不调PH值也可以养细胞,特别是癌细胞,影响不大,我们实验室以前是调的,现在省事,不调了,也能养好

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确实,我曾经用PH值8.0的RMPI 1640养过,确实长的没问题,但是后来我想,不调还是有问题的,因为没有人知道PH值的改变到底对细胞产生了什么样的影响,这些影响有会不会对你的后续实验产生影响,最终导致你的结果出现偏差,而这种偏差的结果可能无法再PH7.2的情况下得到重复验证,最终导致其他学者对你的结论提出质疑。
这点我们还真要想小 日 本 学习,该怎么样就怎么样,不能偷懒。
个人意见。
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fsdd817[使用道具]
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比如:除菌方法的讨论,首先是否需要除菌,然后再谈怎样除菌。如果不需要除菌,为什么,比如有人说1N NaOH、1N HCl就不需要除菌,原因是强酸强碱里面细菌无法生长

支持不用灭菌,要是这也得灭菌,那酒精是不是也需要灭一下菌啊,这玩意应该能杀菌的,不用灭吧。

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上次说的太武断了,后来想想,至少有一种大家熟知的细菌是可以在酸性条件下存活的,HP啊,当年提出的学者也受到了广泛的质疑,后来好像还得了诺贝尔,看见凡事没有绝对的。
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我们实验室是用NaHCO3 来调的 用无菌过滤器过滤后分装 时间长了就知道100毫升培养基大概加多少NaHCO3 来调到理想的值了
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四福晋[使用道具]
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问各位战友我买的1640培养液还用调PH值吗?谢谢!
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utt0989[使用道具]
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受益颇多,我这几天正为培养基pH值的问题发愁呢,我的培养基过滤了两次,pH值达到了8.0,后来用过滤后的HCL调节pH到7.5,我都不敢用这个培养基了,怕把细胞养死。我用的HCL用一次性滤器过滤的,但一个师姐说HCL是强酸,会不会把滤膜给破坏呢?我就更担心我配的培养基的情况了,所以现在也没敢用,想丢掉重新配。
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HP007[使用道具]
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1N HCL的配制方法(100ml)

8.333ml浓盐酸,加水稀释至100ml

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这个应该修正一下。浓盐酸也叫发烟盐酸,发烟是挥发后的液化现象。

如果先取浓盐酸,后加水,那么会有很强的发烟及呼吸道刺激性。

正常应该先准备好约80%体积的水,例如配制100ml溶液可以取80ml水,然后再取浓盐酸加入到水中。用枪加时枪头可以迅速插入液面下加,减少发烟和刺激性。

还有这段话:ps:NaOH要用烧杯称量,产热很厉害。要用容量瓶定容,
如果不是做分析滴定用,只是为了调节pH使用的话,没有必要用容量瓶定容。
NaOH称量少量的最好用称量纸,然后倒入到先加有水的烧杯中,快速搅拌。这么做的原因是防止烧杯干燥不够,如果烧杯底部不小心有少量水分的话,NaOH的溶解热能融化玻璃的。我曾经就把一个玻璃容器给溶了一个大坑。

这些可能常在实验室里干活的群友会认为是废话,谁不知道啊,呵呵。
不过我认为既然是个总结,还是严谨一些的好,可能有刚刚进实验室的群友不熟悉。
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受益颇多,我这几天正为培养基pH值的问题发愁呢,我的培养基过滤了两次,pH值达到了8.0,后来用过滤后的HCL调节pH到7.5,我都不敢用这个培养基了,怕把细胞养死。我用的HCL用一次性滤器过滤的,但一个师姐说HCL是强酸,会不会把滤膜给破坏呢?我就更担心我配的培养基的情况了,所以现在也没敢用,想丢掉重新配。

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滤膜有很多种的,可以过滤不同的东西,比如盐酸。你看看滤膜的说明书就知道了。
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dongdongqiang[使用道具]
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我想请问一下如何配碳酸氢钠。实验室一个星期前用5.6g的碳酸氢钠配了100ml溶液,然使用针式滤膜过滤,过滤完后发现很多很小很小的小东西漂浮,请问一下是什么问题?
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