细胞世界

有个问题请教下楼主~我养的是293T,想试下楼主的二传法，想问下预吹打之后不是要吸走吗？是转到新培养基中？这样的话吹打会不会较后面的不够充分？还有就是不用胰酶消化，仅靠吹打会不会对细胞造成伤害？谢谢楼主！

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预吹打的可以扔掉的，这一步主要就是不想要贴壁不牢的衰细胞。所以进行预吹打。

不用胰酶消化，只是对于某一些贴壁比较不牢固的细胞。胰酶和吹打是都会对细胞产生伤害的，不过你控制的好的话，可以把这种伤害降到最低，不对细胞产生明显影响。

不同的培养基培养出的细胞形态是有区别的，只是不知道对其性能有什么影响。“二传”的做法我认为也不能适用于所有细胞，SP2/0就不喜欢被打扰。
我养的BHK也出现了传代后增值速度变慢甚至停滞的现象，黑点也不少，这倒是可以试试hjdd 的方法的。
另外我也认同不能突然地全部更换原材料，但有时候也是没办法

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呵呵，你说的对，没有哪一种方法是适合所有的细胞的，我的“二传”法我开始就说了，并不一定适合你们的细胞，你们可以试一试，摸索出你们细胞自己喜欢的条件。呵呵。

你养的悬浮细胞是什么细胞，接种密度是多少？
状态不好的情况下可以考虑部分换液，增加新的细胞进行悬浮等等措施。

有个问题请教下楼主~我养的是293T,想试下楼主的二传法，想问下预吹打之后不是要吸走吗？是转到新培养基中？这样的话吹打会不会较后面的不够充分？还有就是不用胰酶消化，仅靠吹打会不会对细胞造成伤害？谢谢楼主！

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预吹打一下，吸走扔掉，因为这些吹打下来的基本上都是不怎么好的一些细胞了。
不用胰酶，是针对某一些特殊的贴壁不牢固的细胞。大部分还是要用胰酶消化传代。

仔细拜读了，很有收获哦
不知道是否适用于悬浮细胞？我养的是悬浮的，不知道悬浮细胞状态不好的时候用塑料培养瓶养是不是会好一些

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呵呵，悬浮细胞在塑料瓶或者玻璃瓶都一样，只是悬浮细胞非常重要的一点是细胞的生长密度问题。你可以将细胞的密度留大一点，细胞会比较容易生长，另外，换液的时候，换一部分的培养液。这样有利于细胞生长，这要求你计算血清的浓度，要保证里面的是10%，所以你配置的培养基要高一点，自己算吧。呵呵。

学习了，我养的是角膜上皮细胞的，原代不传代，在3.5MM平皿中培养完直接提RNA。请教楼主细胞计数怎么计啊，我师姐叫我在显微镜下数，怎么可能数的过来啊。拜托指点下，万分感谢。

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那你只能同时多做一个副空，培养完提取RNA的时候这空消化下来，用细胞计数板计数。显微镜下数也是可以的，但是自觉太难，数不过来。一般可以划分区域。只数一部分。然后计算。貌似需要特殊工具的。。。