细胞世界

兄弟，不要着急，慢慢来分析找找原因！
虽然没有养过你的这个细胞，但是人觉得方法学上都大同小异吧。
第一，按你说的。传到三代之后到发现死亡中间间隔了有四天吧。这个时间对于大部分细胞都是不好的，是需要处理的。除非是在量特别少的情况下（即便这样，为了使细胞状态更好，也应该3天换液）。

第二，我不知道你们实验室为什么会用甲醛熏蒸？一般紫外灭菌完全可以了。虽然不一定就是因为甲醛熏蒸的原因导致细胞死亡，但是头一天熏蒸，第二天死亡，说没有关系的话这未免也太巧了点。甲醛的毒性众所周知，甲醛是有细胞毒作用的。甲醛对生物细胞蛋白质有破坏作用，是一种毒性很强的原生质物质。在一篇文献看到过：经甲醛染毒处理后 ,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率逐渐升高 ,与对照组相比有极显著性意义。结论　甲醛可不同程度地影响小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核形成率 ,并呈良好的剂量 -效应关系。所以，感觉甲醛是凶手的可能性还好蛮大的。

第三，死亡的瓶子里有颗粒状的沉淀贴附在瓶底，但是轻轻摇动就会脱壁。这个不像是污染的迹象。以后再次遇到这个情况，不要着急把死亡的细胞就扔掉，等完好的细胞都处理好之后，处理这些细胞。可以按照我所说的二传的方法试几次。吹打之前着重要多洗两遍，建议用PBS或者无血清培养基洗。

第四，重新配的培养基，你就敢全部换液啊？还是应该用原培养基留几瓶，以防止污染。否则万一新培养基污染的话，就无可挽回了。（不过我还是能够救回来的，呵呵。）现在你应该把今天变成的这8瓶按照我说的方法试一下。你要确定新配的培养基是没有污染的，只要不是污染就好办。另外的几瓶，你暂时不要动它，3天后换液或者传代，按照我说的方法试一下。我估计你的细胞状态应该都比较老化一点了。刚开始可能没有把握好时间。干细胞在8代以内生长速度都是比较快的，贴壁速度也很快的。所以你着实还是需要再摸索一下最佳传代时间和频率的。

呵呵。祝你好运啊！不要慌！

我摸出来的条件是这样的。细胞长得很快的，在塑料瓶中贴壁更快。很容易就老化。所以需要你更加频繁地换液和传代的。
你需要在你的细胞上试一下就知道了。
玻璃瓶用过的必须泡酸再高压的。是麻烦点，但是很好用。

你的细胞是从一开始就有这样的问题还是后来在你养的过程中逐渐出现的？

如果是一开始就有这个问题的话那就可能是细胞本身的原因了。如果是你养的过程中后来出现的那就是养的问题了。你可以按照我的方法试一下。在传达的时候，先在显微镜下找到铺路石状态的好细胞，只吹打该处，其余的不要，然后把吹下来的细胞传入新瓶，观察生长情况，这时你可以适时进行“二传”。呵呵。希望对你有帮助。

另，脐静脉内皮细胞属于成纤维细胞，本身就是呈短梭状或铺路石样镶嵌排列，细胞为扁平多角形。所以你的细胞形态并不是不符合。好事。加油！