细胞世界

我养的是A549细胞，常常在传几代，就出现细胞颗粒感很强，时间一长就会在培养基中出现细胞少的颗粒，如果一消化就会出现大片死亡，常常养着养着就大部份细胞就老化，死亡了，请LZ及各位高手指点。

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我在养这个细胞，开始也出现颗粒感很强这个问题，后来发现是吹细胞速度过大。
解决办法：细胞扔掉挺可惜的，一般是贴壁后，摇晃培养基，吸走，换新的，类似楼主说的2传。
后面传细胞时，温柔一些就好了。不过A549老化的问题，我倒是很少遇到，我一般是隔天传细胞做实验，一般是半年复苏一次，除非遇到非正常情况，比如培养箱大规模污染，会重新复苏。

楼主二传的方法不错，但我想楼主忽略了至关重要的一点，细胞形态不好不会是无缘无故的，这样处理的同时还应该寻找原因，才能从根本上加以改善。
还有楼主前面回答问题说培养基没有浑浊应该就不是污染，这肯定是不对的，我想可能是你回答的时候疏忽了。不浑浊不一定没有污染，培养基没有变黄也不一定没有污染，只要细胞生长状态发生改变了，就不能排除污染的可能。

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呵呵，这位兄台说的在理。是我回答时的疏忽，措辞不当。
一般来说，污染的发生是很容易从外表象看出来的，培养基的颜色，通透度，折光度都会发生明显的改变，肉眼几乎可见污染物的存在，在显微镜下观察，能够明显看到污染物的存在。但是有一些污染，不常见的微生物污染吧可能有例外，可能会观察不到污染物，但是至少培养基的通透度和折光度一定会发生明显改变。

细胞生长状态的改变，有可能是污染，但是大多数情况下，只要没有明显的污染迹象，细胞生长状态的改变不会是污染引起的。细胞的生长状态时刻在发生变化，影响因素很多。而污染其实可能性最小的一种。并且，实际中，污染的发生情况很少见。我甚至好几次没有在洁净台中操作，只在实验室里，点了一酒精灯，照样没有污染。呵呵。操作其实很重要的额。呵呵。

多多交流呵呵。

我养的是正常大鼠肝细胞株BRL-3A，同学给我的，之前传了多少代就无从追溯。最近养老是出现细胞状态不好，比如我传代，0.25%的胰酶消化三分钟内可以消化下来，第二天全部贴壁，死细胞很少，而且长得很快，几乎两天就得传一次。之前老是有细胞拉丝、空泡、变薄等情况，但是也不影响生长，我怀疑是培养基的问题，换了别人的培养基，现在有空泡的细胞比较少，倒是细胞里面出现黑点点，镜下培养基是干净的，黑点点不在培养基里面的。肉眼培养基是橘红色的，也是澄清的。如果是污染应该不是这样吧。但是细胞里面那些黑色的点点到底是啥真希望能有张照片就好了。

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你用的应该是四季青的牛血清吧？？？

我养的是a7r5细胞，一传代就会有黑色颗粒出现，显得好像污染一样，但应该不是污染，换换夜就少一些，直到传代前都没事，可一传代就出现。不知道能不能用这个方法试下。以前传代别的细胞时没有这种情况出现。是不是我吹打得太用力太粗暴了？
请教下~谢谢！

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先问一下，你用的是四季青的牛血清吧?或者是澳大利亚或者新西兰产的牛血清吧？

我很奇怪楼主的观点。细胞的生长是需要一定的条件的，像你说的那样反复把细胞从培养箱里面拿出来不会影响细胞的生长吗？细胞刚达到最适合的生长环境，马上环境又变了，这样对细胞不会有影响吗？！

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我说的是在细胞生长状态很不好的时候，有老化或者其他问题的时候，为了使细胞恢复到优秀的状态，只能择优而取那些年轻力壮，生长状态好的！并不是让你一直这样子！

请教楼主大哥个问题:我养的是新西兰大白兔骨髓间充质干细胞。从开始培养，原代到第二代都挺好，细胞形态也挺漂亮的。后来实验室有调整，养细胞的人比较多大家就把培养箱分开了，我传第三代后就放在就培养箱里了（坏过一次，刚修好）。第二天发现细胞贴壁的很少，大部分都还漂着，而且整个培养基变成粉红色，以前都是橙黄色。后来发现培养箱上显示的二氧化碳浓度在7.8左右一直跳，不稳定。检修人员检查过后说是风扇坏了，培养箱中二氧化碳不均匀，所以不稳定。我分析可能是二氧化碳分布不均导致培养基偏碱所致，所以我把所有的细胞全转到新的培养箱中，第二天发现培养基颜色虽然好些了，但飘起来的细胞更多了，贴壁的细胞也都开始变圆脱落，我随后赶紧换液，第三天依然飘起很多细胞，贴壁的所剩无几而且形态皱缩变圆，很郁闷，不知道该怎么办。请高手指点是什么原因，该怎么处理？

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我觉得还是PH的问题，刚开始细胞在最不容易生长的时候长的都很好，后来却不贴壁了。这就说明培养基和细胞都是没有问题的，问题出在中间的部分，也就是你说的CO2的浓度问题上。这直接导致了培养瓶内培养基的PH，影响到了细胞膜表面的正常分布，所以细胞贴壁情况改变，细胞悬浮皱缩，变圆是在自保的应激反应，以免死亡。

所以建议你重新确定培养箱的CO2浓度是否真的正常，另外重新配置培养基，把血清浓度提高到15%，PH值配低一点（少加一些碳酸氢钠）。

后续交流。。。

请问各位大虾，本人最近在养panc-1胰腺癌细胞，一周前复苏的细胞，由于量较少，培养一周后才传代。用胰酶消化时细胞都是一大片一大片的的脱落，虽然吹打了四五十下，但传到新瓶后很多呈团块状，贴壁后感觉像是一个一个小的岛屿，而且很多圆球形细胞附在表面
想知道是消化有问题还是细胞株本来就有问题？不胜感激！

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建议你在新塑料瓶（大号）中培养细胞，消化的时候先用0.5ml胰酶润一下细胞生长的底部面，然后快速吸走，再加入胰酶进行消化，吹打的时候稍微加大力度。
一定要在塑料瓶中培养你这个细胞，可以避免细胞抱团的情况出现。
后续交流，祝你好运！