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标题:[讨论帖]如何把细胞养的更漂亮

yychen[使用道具]
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我用的是同学给我的进口小牛血清+GIBCO培养液(公司配好的),细胞以前会拉丝啊,空泡啊,后来我完全用同学的培养基了,现在拉丝空泡很少见,就是细胞里面有颗粒。我自己总结原因:1,要么细胞老化了?但是同一批复苏的其他人养得好好的。2,污染了?我的PBS,滴管,枪头,瓶瓶罐罐定时高温消毒。或许是培养基污染,但是细胞长得飞快,两天就得传一次代,而且培养基干净的,高倍镜下都看不到脏东西。3,培养基出了问题,我之前用公司配好送来的培养基细胞会拉丝,空泡等营养不良的情况,用了同学的培养基后上面情况没有了,就是有颗粒,是不是好转的表现?
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铜雀[使用道具]
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回复 #51 yychen 的帖子

有一些细胞本身就会分泌一些东西如颗粒状。我养脑内皮细胞的时候也是经常出现这个问题。我是用二传的方法慢慢把颗粒物去除的。

据说产自澳大利亚和新西兰的血清经常会有黑色或者透明颗粒状物质存在,我查过资料,有些说是一些蛋白的结晶,有些事杂质没有去除纯净。

不过,既然你的细胞开始出现好转,并且生长速度也这么快,你完全可以试一试二传的方法,看能不能去除颗粒物,如果重复几次之后还是很多或者根本没有减少,那就是细胞本身的分泌物了,可以不用管它吧。

祝你好运啊!
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铜雀[使用道具]
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我做糖尿病肾小球脏层上皮细胞(足细胞)培养,要用高糖刺激,文献报道正常情况下是RPMI1640+5mMol/L葡萄糖,高糖培养时RPMI1640+30mMol/L葡萄糖.但我看到1640说明书上的葡萄糖含量是2g/L。折算成葡萄糖浓度是11.1mMol/L.那我配培养液时该如何配制?谢谢!lz 有养足细胞的经验吗

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养过小鼠肾小球细膜细胞,没有养过你说的这种。呵呵。

高糖培养应该是指葡萄糖终浓度是30mMol/L吧。正常培养的葡萄糖浓度也不是固定的,不同的细胞和培养基都不同。
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flower-201[使用道具]
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培养基的渗透压过少,这个没想过,因为前面的师兄们都是这么养的,这个可能不是问题,这几天发现培养基中飘着密密的充满细少的颗粒,很多细胞轮廓都很不明显了。我想这是不是因为支原体或衣原体感染,长到一定程度,就裂解细胞,飘着的是裂解的细胞碎片。请分析指导。

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我不太清楚这位楼主养的是什么类型的细胞,在我们实验室,一般培养皿中出现大量细小颗粒状物质,而且细胞也都会慢慢死亡,这些我们一般定义为细菌污染,我们培养的都是杂交瘤和肿瘤细胞,不知是不是有共通性。
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回复 #54 flower-201 的帖子

出现大量细小颗粒状物质的时候,应该就是污染了。细菌污染一般能在镜下看到密密麻麻的。支原体或衣原体污染很多的时候镜下能见细沙状物质。这是共同的。

看你描述的情况就是污染了。很像是支原体污染。丢弃吧。

我说的是有时候细胞培养中会出现大的颗粒状物质,但是不是很多,对细胞生长状态影响也不大。这些会是血清的问题或者是细胞自身分泌的物质。可以采用二传去除。

祝你好运啦!
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请问楼主 你那种“二传”的方法适用于刚复苏的细胞吗?
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对于刚刚复苏的细胞,最好还是不要用,除非细胞真的是长的特别快,状态也很好。在你确定复苏的细胞活了之后,量多了之后,你再进行优选,二传是可以的。这比较保险。呵呵。加油啊!祝你好运!
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兔唇[使用道具]
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培养基的渗透压过少,这个没想过,因为前面的师兄们都是这么养的,这个可能不是问题,这几天发现培养基中飘着密密的充满细少的颗粒,很多细胞轮廓都很不明显了。我想这是不是因为支原体或衣原体感染,长到一定程度,就裂解细胞,飘着的是裂解的细胞碎片。请分析指导。

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我养的原代牙髓细胞也出现这种细小的颗粒,主要附着在细胞上面,密密麻麻的,培养液里的倒是比较少,不知道上面东西,愁啊!
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爱老虎游tt[使用道具]
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觉得你的方法来传代养好细胞挺不同的,我刚开始学养细胞,我也试试你的方法,我觉得应该能行,特别是贴壁牢的细胞用这个方法应该更能找出好的细胞吧.但是我听说细胞老化以后,贴壁反倒是会更牢,那这样的方法是不是就难处理了呀?
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铜雀[使用道具]
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回复 #59 爱老虎游tt 的帖子

老化的细胞传代后贴壁用时较长。所以你还是可以帅选出比较好的细胞的。
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