细胞世界

我也在养MCF-7细胞，复苏的细胞里有小黑点可能是冻存时的血清有杂质，也有可能是细胞代谢产生的。我养的MCF-7细胞里周围也有小黑点不知道是不是传说中的黑胶虫，还是细胞本身产生的。细胞状态不太好，郁闷呐~还请多多指教~

===========================================================================================================

小黑点排除不是污染如黑胶虫的话就应该是血清中的杂质。
灭活的血清比较容易产生黑色小颗粒状物质，肉眼不见，镜下可见。
另外，细胞趋于死亡的时候也会产生这些黑色物质流出细胞外。你可以在传代或者换液的时候，用PBS或者培养基洗一下细胞。这样会好点！

LZ，你说的方法很值得学习，受教了！我现在遇到一个问题，上学期冻了一批MCF-7细胞，冻之前细胞状态很好，这学期重新复苏，但是复苏出来的细胞长得轮廓不是很清晰，而且也不是之前拿来的那样，细胞面上好像又一点点小黑点，不知道是不是细胞破碎，但是不可能是污染，因为培养液很清晰透亮，不知道问题出在哪了，希望指点下，谢谢！

===============================================================================================================

不好意思，很久没有来关注我的这个帖子了。呵呵。今天才看到你的问题。
你的这个问题，我现在也遇到了，年前的时候细胞好的不能再好了，过完年回来，细胞再复苏，一直不好。好几次都是这样。我自己也不明白到底问题在哪里。但是可喜的是，现在终于好了呵呵。

对于这个问题，我分析可能的原因：

1.冻存的时候细胞没有处理好！就是没有把细胞的最佳状态保存到冻存。这个冻存的时间还是很重要的。我就不祥述了。

2.复苏的时候，把血清的浓度提高到20%。复苏后，隔天观察，直到贴壁细胞比较多的时候再进行换液。如果相隔时间较长，中间你可以补充培养基进去。

3.不要高速离心，要1200以下。这样会好一点，如果细胞1200很少或者离不出来，可以提高到1500.不要超过5分钟。

呵呵，暂时想到这么多。祝你好运！

楼主你说污染的细胞你还是有拯救的办法的，具体是什么呢啊？能赐教么？

=======================================================================

对于贴壁生长的细胞的污染拯救方法：
用PBS洗2-3遍后，再加入足量PS洗2-3遍，然后加入培养液，再加入2ml的双抗。隔天重复。
在实在危机情况下可以拯救的回来。如果还有细胞那还是重新复苏的好。

楼主说的主要是贴壁细胞的二传，那悬浮细胞有没有什么经验呢？悬浮细胞也会出现一些死细胞或者状态不好的细胞，我问过实验室的师兄师姐他们说可以试试梯度离心，具体怎么个做法啊？谢谢啦！

===============================================================================================================

悬浮细胞就只能梯度离心，就是以不同的离心速度对细胞悬液进行离心。一般从高到底。
因为死细胞和细胞碎片与活细胞比较而言，其比重小，沉降速率大。所以低速离心的时候，能够把活细胞离心出来而死细胞和细胞碎片留在细胞悬液中。经过几次的梯度离心，就可以筛选出大部分的活细胞。。。

顶楼上，盼大家都来说说养悬浮细胞的经验吧。我养的急粒细胞系状态一直不好，细胞不亮，扁，折光性差，增值慢！该试的方法都试过了，郁闷。

===========================================

PH值你掌握好了么？急粒细胞系对PH值还是很敏感的。

楼主，你好！
前几天我刚开始养细胞，最开始是同学给我传了一瓶，养了两天，长得还好，然后传了两瓶。这两天那三瓶细胞都有不同程度的细胞碎裂样的细小裂片或斑点，但培养基还是清亮的，用PBS洗两三遍也洗不下去。
请楼主分析一下问题出在什么地方，该怎样解决。
多谢！

==============================================================================

细胞碎片是最后可能的，有一些细胞死亡了。去除方法就是洗，再洗，轻轻吹打然后再洗。。。呵呵。

我养的是A549细胞，常常在传几代，就出现细胞颗粒感很强，时间一长就会在培养基中出现细胞少的颗粒，如果一消化就会出现大片死亡，常常养着养着就大部份细胞就老化，死亡了，请LZ及各位高手指点。

===============================================================================================================

这个细胞我在养，它应该算是很皮实的细胞了。颗粒感很强应该就是在凋亡的过程中了，两天一换液或是三天，四天或是一周一传代。细胞密度不一太大。我手里的A549长的很快。用的是5%的血清。你再次传代时离心一下。弃去上清，以免影响其他的细胞，留下状态好的细胞用来传代试试。

非常同意这位仁兄的建议。
A549是肺腺癌细胞株，生长速度比较快。正常培养是1640+10%新生牛血清即可。由于其生长速度快，所以必须要缩短传代时间。不能等到细胞长的很多的时候再去传代。必须要在60%-70%生长密度的时候就进行传代，这样子才会保证细胞的状态。
另外，这位兄弟说的离心也是一个不错的方法，可以筛选出比较好的细胞留种。我一般采取双传的办法：
首先不加胰酶，倒掉就培养基加入少量新培养基洗1-2遍，然后直接简单吹打一遍，把贴壁不牢固的细胞吹打下来传入新瓶，然后再洗一遍，加入胰酶消化传代。你可以比较这两批细胞哪个长的更好一些，就知道你的细胞喜欢什么样的方式了。对于A549一般是消化3-5分钟的比较好。要保证细胞被一个个消化开才好。