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标题:[分享帖]凋亡形态学

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Apoptotic human keratinocytes that were fixed with paraformaldehyde and stained with fluorescein concanavalin A (C827). The cells were subsequently permeabilized with acetone, stained with propidium iodide (P1304, P3566, P21493) and visualized by confocal laser-scanning microscopy. This photomicrograph clearly shows that the green-fluorescent lectin staining outlines the apoptotic surface blebs, whereas the red-fluorescent propidium iodide stains the interior of the blebs. Image contributed by Livia Casciola-Rosen and Antony Rose, Johns Hopkins University. Reproduced from by copyright permission of the Rockefeller University Press.
凋亡的人类角化细胞被多聚甲醛固定,被荧光素标记的刀豆蛋白A染色。然后经丙酮渗透处理,被pi染色后能被共聚焦显微镜观察。本片显示的绿色荧光(外源性凝集素)勾勒出凋亡细胞表面的小泡,红色荧光(pi)被包被在其中。


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Apoptosis induced in Jurkat cells with 10 µM camptothecin. The cells were then treated with the reagents in the Vybrant Apoptosis Assay Kit #4 (V13243). Apoptotic cell nuclei were labeled with YO-PRO-1 dye (green) (Y3603). Necrotic cells were detected with propidium iodide (red)
10 µM喜树碱诱导的Jurkat cells(慢淋。G1检测点缺陷细胞) 凋亡。细胞然后经 Vybrant Apoptosis Assay Kit #4 (V13243).处理。凋亡细胞核被YO-PRO-1绿染,坏死细胞被pi红染。


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Jurkat human T-cell leukemia cells treated with 1 µM camptothecin. The externalized phosphatidylserine, a characteristic of early-stage apoptotic cells, was detected with Alexa Fluor 488 annexin V (A13201). The late-stage apoptotic and necrotic cells were stained with propidium iodide (P1304, P3566, P21493). The image was acquired using bandpass filters appropriate for fluorescein.
Jurkat 人类白血病T细胞经1微升喜树碱处理,ps外翻,早期凋亡特异性的特征被annexin-5检测到。晚期凋亡和坏死细胞被pi染色。本图是由相应的荧光滤光片获取的。


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HL-60 cells treated with camptothecin for three hours. The DNA strand nicks characteristic of apoptosis were detected with the TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase–mediated dUTP nick end-labeling) assay using the fluorescently labeled nucleotide, ChromaTide BODIPY FL-14-dUTP (C7614). Image contributed by Zbigniew Darzynkiewicz, Cancer Research Institute, New York Medical College.
HL-60 cells(急粒,p53缺陷)被喜树碱诱导3小时。DNA段端被荧光标记的脱氧核苷酸末端转移酶标记。


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Detection of apoptosis in SK-N-MC neuroblastoma cells. Following a six-hour exposure to hydrogen peroxide, cells were labeled with Hoechst 33342 (H1399, H3570, H21492), tetramethylrhodamine ethyl ester (TMRE, T669) and rhodamine 110, bis-L-aspartic acid amide (R22122) for 15 minutes. Apoptotic cells show green cytosolic fluorescence resulting from cleavage of the rhodamine 110, bis-L-aspartic acid amide substrate by active caspase-3. The staining pattern of the Hoechst 33342 dye reveals that the majority of the rhodamine 110–positive cells also contain condensed or fragmented nuclei characteristic of apoptosis. Furthermore, the rhodamine 110–positive cells are also characterized by an absence of polarized mitochondria, as indicated by their failure to load the positively charged mitochondrial indicator TMRE. The image was contributed by A.K. Stout and J.T. Greenamyre, Emory University.
这张太多了,哪位帮我翻译一下??呵呵。


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以上图片来自:cuturl('http://www.probes.com/servlets/gallery?id=recent')
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发育·线虫·凋亡
一个有关死亡之舞的科学故事
cuturl('http://magazine.oursci.org/200211/021101.htm')
…………出生之后,线虫的发育还将继续,从形态上,还需要经过3次蜕皮,从细胞数量上,一些器官的细胞还要继续分裂,比如,肠细胞还需要多来14个才够,而表皮细胞也还需要继续分裂直到数量达到213个。在这个数量继续增长的时期,细胞最多时达到1090(雌雄同体,若是雄虫则为1179)。然而,我们前面已经提到,完全成熟的成虫只有959个细胞,那么,多出的131个细胞又到哪里去了?面对这个问题,大家最先想到的答案一定是“它们死掉了”。这答案不错,不过它们在这里死亡的方式很有点独特。
  显然,若通过坏死来清除发育中多余的细胞是不明智的,那么,怎样做才恰如其分呢?看来一种受控制的,且加以严密保护的细胞消失方式是再好不过了。这正是在线虫发育中人们观察到的,那多出的131个细胞的死亡方式。它叫“凋亡”。
  凋亡是对英文单词apoptosis的意译。Apoptosis也是一个希腊文来源的词语,它原本写作απτωστσ,apo 来自απο意为 from,而-ptosis则从πτωστσ获得语源,意为"fall"(落下)。在希腊人那里,这个字眼所表达的正是花儿凋谢,树叶落下的景色。古诗中“一叶落而天下知秋”的意象恐怕正是再好不过的一种意境:优雅,含蓄,还带点淡淡的忧伤。因了内敛而不张扬,更因为飘落时那种虽然有些无奈却坦然以受之的美,古往今来的国画家和诗人总不乏对之表达敬意的举动,正所谓“零落成泥碾作尘,只有香如故”。
正因为发育中细胞死亡表现出的那种含蓄和内敛的美,注定了凋亡会成为一个绝佳的名词。这一死亡的舞蹈首先从细胞核跳起。由蛋白质构成核仁率先崩解,变成一些可以被染料染成深色的斑块。而由DNA组成的染色质则向包裹它们的核膜聚集,逐渐形成一些状似新月的致密斑,最后完全压缩成为一整块。这个过程被病理学家称为“核固缩”。电子显微镜下面,可以清晰的看到折叠起来的DNA链的断裂。随着核固缩形成,细胞的体积也开始缩小,细胞骨架逐渐断裂,起支撑作用的脚手架的倒塌使靠它们维持张力的各种胞膜塌陷。胶质胞浆的压力使膜塌陷的方向只能向内进行,于是已经断裂并聚成一团的细胞核被分割包被起来,形成一团又一团类似肥皂泡一样的圆球。而细胞外膜的内陷则把各种有可能造成广泛损害的化学杀手——各种威力强大的酶类也包裹起来。在这过程中,细胞膜表明的各种蛋白质-糖天线的结构也随着膜的变化而改变起来。当这些改变被周围细胞探测到,身体中专事打扫卫生的巨噬细胞应声而动,赶来把这些已经变成凋亡小体的细胞碎片一一吞进腹中,最终完成一个温和而井然有序的细胞死亡过程。
……………………
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线虫发育中细胞的凋亡:
用共聚焦显微镜观察线虫胚胎,在正常胚胎CED-4位于线粒体。而凋亡细胞CED-4(红色)和核纤层蛋白(绿色)在核被膜(黄色)均可见。该实验有助于揭示,在细胞凋亡中CED-4从线粒体易位到核被膜


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cuturl('http://www.cmechina.net/cme/html/cme_K3000020/0703/text_4.htm')
(1)形态学特征:发生时首先是染色质的凝集,嗜碱性染色增强,然后细胞核崩解此时线粒体保持形态正常。最后细胞体积缩小,一部分细胞质和核碎片进入由膜包被的程序死亡小体,他们从细胞表面出芽脱落,并被巨噬细胞、上皮细胞吞噬。
  (2)生化特征:染色质降解,核小体间连接DNA部位被降解,产生寡聚核小体DNA片段,即180-200DP整数倍的不同长度的DNA片断。


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midas 主任凋亡检测贴中,细胞形态学方面的资料:

1 光学显微镜和倒置显微镜
  (1) 未染色细胞:凋亡细胞的体积变小、变形,细胞膜完整但出现发泡现象,细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
  (2) 染色细胞:常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化,核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。
2 荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
  一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。
  常用的DNA特异性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的,主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。
  Hoechst是与DNA特异结合的活性染料,储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用时用PBS稀释,终浓度为10 ug/ml。
  DAPI为半通透性,用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度,使用终浓度一般为10 ug/ml。
  结果评判:细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期:Ⅰ期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased),部分染色质出现浓缩状态;Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;Ⅱb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体


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