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标题:[分享帖]细胞实验原创经验(教科书所没有提到的)

西子[使用道具]
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关于瓶盖,培养皿盖在无菌操作台的摆放方法讨论!

无菌操作台在使用前一般经过40分钟左右的紫外灭菌(一般细菌的生存周期大于等于20分钟)。为了双保险,我们实验室还在临时用操作台前,用75%乙醇擦拭一遍工作面。当然擦拭得作用之一是含能清除一些紫外线无法处理的物理污染物。

工作时,鼓风机打开,我们应该相信操作台中间部位是严格无菌的,所以无论是容器瓶盖、培养瓶盖还是培养皿盖,在打开时应该盖口朝下放置是安全的。

在无菌操作中,有一个原则,就是不要让操作者的手、手臂出现在任何需要无菌操作的容器开口上方,如果瓶盖口向上,很容易造成这种手臂穿越其上空领域的机会,也就是污染几率大大增加,所以,强烈建议,瓶口向下放置。

不过,这里强调一下, 每操作一段时间,有可能有液体溅出,工作人员离开操作台又返回,记住每次返回都要用75%乙醇消毒操作台和双手,以防范污染。
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盼盼[使用道具]
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手要保持干净,这点我觉得很重要。
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麦丽素1986[使用道具]
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书上提到复苏时将水浴锅的盖子盖上还是有必要的
本人今天刚刚遇到一个冻存管爆炸
虽然手掌没出血,确实痛了好久
应该是冻存管的盖子未封严,以致管内有液氮进入

至于孵箱底盘我们实验室是每两周用75%的酒精先擦一遍再加用硫酸铜洗一遍,效果很好
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西子[使用道具]
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有时候,最近的东西,却最容易忽略!

无菌操作台里的废液瓶一般是塑料或玻璃烧杯,平时大家把废弃的培养基,PBS液、生理盐水、胰酶液、各种刺激溶剂等废弃溶液注入其中,试验进行完后倒掉,或许你会加一些75%酒精稍微涮洗一下。值得注意的是,如果长久不清洗废液瓶,这可是一个大污染源呢!而且它就在你理所当然认为的无菌区!

还需注意的是酒精灯瓶体也容易滴上培养液、血清等废液,每次试验完后,应该立即擦拭干净!
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西子[使用道具]
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在细胞室,如果有2-3个无菌操作台,且使用率较高,可以在不容易碰及的地方放置一个有封闭盖子的大废液缸,可以在里面先盛放一些较浓的84消毒液,一般每个人操作完后可以把废液瓶内废液倒入大废液缸,过1-2周后清理大废液缸一次。

细胞室的门把手、孵箱门把手,冰箱门把手要经常用75%酒精擦拭,倒置显微镜载物台,附近桌面要注意清洁,他们都有可能带来污染。
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西子[使用道具]
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关于移液器的使用:

1)操作移液器要平稳、缓慢。释放按钮时不宜太快,以免液体冲入套筒;

2)吸嘴内尚存液体时,切勿将移液器平放活倒置,谨防液体流进移液器内部,造成污染,而且很难洗净;

3)使用强酸或其他腐蚀性很强的液体溶剂后,可将移液器拆开,以蒸馏水或去离子水清洗活塞和密封圈,鼓风干燥后再组装起来。
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西子[使用道具]
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有些教科书上强调,在无菌操作台一次只可以处理一种细胞,其实可以通融的,有时你由于试验需要,养了5-6种细胞,如果生搬硬套,一次处理一种细胞会耽误时间或误事的!

我采取的办法是,每一种操作后都用75%乙醇擦拭操作台和双手。一般在等待细胞消化或离心的3-5分钟进行此操作,这样可以达到统筹时间的效果,而且很少发生交叉污染。

另外,为了避免培养液多次使用,多少会有蒸发现象,一般可旋紧盖帽后可以再用封口膜缠一圈密封,可以有效防止培养液蒸发,也可以有防止细菌侵入。
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rxcc33[使用道具]
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请问有哪位养过胰岛INS-1细胞吗?可以传授一些经验吗?我准备开始养。
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hyuu[使用道具]
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细胞最怕污染了。真的是细节非常关键。每一处都要注意无菌观念。
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西子[使用道具]
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建议搂主到ATCC网站查阅相关细胞培养资料,也可在谷歌上查。
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