[求助]LIPOFECTAMINE 2000转染问题若干 - 经验共享

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标题:[求助]LIPOFECTAMINE 2000转染问题若干

薄荷侠[使用道具]
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发表于 2012-1-14 12:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也是用lipofectamine 2000转293, 我感觉lipo 是有一定的细胞毒性,但对于比较tough的细胞,比如CHO, HepG2来说，这种毒性根本不明显,293是很picky的,根据我的经验,转293时:第一,细胞状态要好,第二,细胞密度要够,按照说明书上的说法,是要求90~95%的confluent.还有,我一般是转染后5.5h换液,work的挺好,细胞也没死.其他的都是按照说明书上来的.
养293的同志们,大家一起努力吧!

白白的[使用道具]
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发表于 2012-1-14 12:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第二次实验几天前就做了，因为最近比较忙，今天才来。
再向大家汇报下我的第二次实验结果：

这次转染我做了如下改进：
1.提高铺板密度
2.转染时间稍微延迟（在36小时转染，此时细胞状态已经很好)
3.lipo2000的量稍微减少——六孔板，每孔4ul。质粒每孔2ug。

转染后5小时，我基本没有发现细胞状态有明显改变（第一次时，有很多细胞都飘起来了）。但是为了保险起见，我还是在6小时的时候换了培养基。转染后48小时提蛋白，跑WB验证，目的蛋白含量很高。转染成功！

总结经验：
铺板密度要高，转染时机的选择应该是细胞状态好的时候，不一定要铺板后24小时。

补充下，我用的是293细胞。

tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-1-14 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有没有人传授一下转染HepG2细胞的经验？

dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-1-14 12:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有人做过446细胞转染吗？求经验

dotaaa[使用道具]
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发表于 2012-1-14 12:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

求助：
1、我想转染H446细胞，大家有转染过这个细胞系的吗？用的那种转染试剂？转染效率如何？
2、大家从哪个代理公司买的lipofectamine 2000，多少钱？
感激不尽

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