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标题:[分享帖]MTT大全(补充中)

baidukk[使用道具]
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DMSO不怕光
MTT反应后,如不便去除上清,可加入含有HCl的异丙醇溶解,不过不好溶,一般需要用枪吹打均匀。
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蒲公英[使用道具]
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主任:我很不好意思地向您请教,IC50是什么?计算什么?
还有一个关于MTT测定的值,在excel中划折线图时,如果两条曲线地起始点不一致,怎样可以把他们统一到一个点呢?
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duoduo[使用道具]
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主任:感谢您提供我们宝贵的经验。我是正在摸索做MTT的小辈。我有几个问题想请教您。
1.我是用的悬浮细胞做的MTT,但是没有平板离心机,所以就没有办法离心。请问有什么好方法可以代替离心吗?
2.加入MTT后,培养4小时后,发现培养孔内出现了比较大的树枝状的紫色结晶。这些结晶好像是在细胞外的混合液体中,请问这是否是正常情况?
3.我加入DMSO后,震摇了15min, 可是发现还是有紫色结晶没有溶解。而且细胞培养板内的溶液好像变色了。是棕色的了。这是怎么回事啊?
4.我做的是药物对细胞的刺激增长作用,请问我的结果最好用什么来表示?
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北风那个吹[使用道具]
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我也来说两句:MTT法在用于测定药物的细胞增殖抑制作用上还是有些缺点的,我师兄的一篇文章投到 kidney international (影响因子5.0——6.0吧),结果被退了回来,主要是因为这个问题:
“【Table 2 : the MTT test does not assess proliferation, but only reflects the number of viable cells. The OD at 48 and 72hrs arereduced when compared to .........the authors should perform an additional assay for proliferation assessment ( ex : BrdU or thymidine incorporation ) .The MTT data should be shown as bar graphs, and include a time zero lane (to show if the absolute number of cells has indeed increased at 24hrs or not)】”
以上是退槁原文。师兄先正在做BrdU呢。
所以,我觉得:
正如许多大虾所言,MTT在国外的许多大的药物研发机构中,仍被用于大量药物的粗筛,因为MTT法有太多的优点了:简便、快速、重复性好、价格低、所需细胞少、无放射性等等,在国内更是被大量应用于抗肿瘤药物的筛选极其他方面,MTT的确是个好东东。但是如果想让文章发的更好一点,建议别怕多花钱,用BrdU吧!!!
如果哪位大虾能更详细地介绍一下MTT、BrdU、以及放射性同位素掺入试验等方法的优劣极其原因,那就更好了,谢谢。
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统计学假设检验的 方法 需要再补充。例如 :不同的试验设计,可以有不同的假设检验方法t检验,方差分析,X2检验。
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ha111[使用道具]
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另外还有一个问题需要向大家请教:
IC50与时间有没有关系?如果我分别培养3天和4天,计算出来的结果有没有差别?我正在准备作这个实验,现在还处于纸上谈兵阶段,有许多问题都搞不清,希望大家不吝赐教。谢谢!
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831226[使用道具]
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最近做了很多次MTT,发现这种方法不是很稳定,看趋势没问题,但要根据其得出结论,未免有些粗。
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兔唇[使用道具]
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CCK-8,CCK-F,都是日本产的cell counting kit。 不是MTT的改进品。前者的作用机制是细胞中的脱氢酶使该试剂产生一种有黄色物质(formazan),它在460nm有最大吸收。作用比MTT,WST-1都敏锐。
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rxcc33[使用道具]
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急请教:调零孔最终是只有DMSO吗?选用测定波长540nm可以吗?因为我科没有酶标仪,测定需要到别处,若加完后不能立即测定可以过夜吗?若可以又将如何保存该板呢?加入DMSO后震荡使其溶解,对震荡力度及时间有要求吗?剧烈机械震荡可以吗?例如放在漩涡混合器上。望请大家指点!不胜感谢!!!
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bluelake[使用道具]
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要是贴壁细胞,就可以不用离心。
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