[分享帖]流式图片专区 - 经验共享

细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [分享帖]流式图片专区

1769 10/177 |‹‹‹8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 ›››|

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[分享帖]流式图片专区

社会主义好[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79862
精华 0
积分 184
帖子 128
信誉分 100
可用分 1371
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态离线

发表于 2012-1-20 10:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教几个关于流式结果的问题！
1，每次检测同一种细胞膜表面糖蛋白（比如血小板表面CD62p），FSC、SSC、FL1及FL2通道的voltage和gain不变，对否？
2，每批标本可能存在处理差异，是否gate可以稍微移动一下范围和位置？是指批之间gate可否不同。
3，分析直方图时每个标本的mark是否都需一致，抑或同一标本来源（包括对照管和标本管）mark一致即可？如果是前者，那么isotype的意义何在？如果是后者，MFI差异岂不很大？
4，了了学长，您做过CD62p的流式检测吗？望告知结果。

社会主义好[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 79862
精华 0
积分 184
帖子 128
信誉分 100
可用分 1371
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态离线

发表于 2012-1-20 10:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有一个问题：我要订购一种荧光标记的试剂，有0.2mg和2mg两种，我不知道做流式，前一种够不够用，是sigma的lectin. 用老美的钞票买，真是心疼。

了了[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73224
精华 0
积分 367
帖子 453
信誉分 100
可用分 3031
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-1-20 10:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 社会主义好 于 2012-1-20 10:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
还有一个问题：我要订购一种荧光标记的试剂，有0.2mg和2mg两种，我不知道做流式，前一种够不够用，是sigma的lectin. 用老美的钞票买，真是心疼。

国外的抗体一般0.2mg可以检测100份。

了了[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73224
精华 0
积分 367
帖子 453
信誉分 100
可用分 3031
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-1-20 10:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 小螺号 于 2012-1-20 10:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我在做HELA细胞的thymidine双阻断同步化,准备用流式检测细胞周期,为什么我送检的细胞总是碎的特别多,有没有哪位大侠指点一下如何收细胞?谢谢

我觉得不是收集细胞的问题，可能是同步化处理过头了，可以尝试时间和剂量减低后的条件。

了了[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73224
精华 0
积分 367
帖子 453
信誉分 100
可用分 3031
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-1-20 10:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 社会主义好 于 2012-1-20 10:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请教几个关于流式结果的问题！
1，每次检测同一种细胞膜表面糖蛋白（比如血小板表面CD62p），FSC、SSC、FL1及FL2通道的voltage和gain不变，对否？
2，每批标本可能存在处理差异，是否gate可以稍微移动一下范围和位置？是指批之间gate可 ...

1 流式检测后的条件一旦确定，是不应该改变的。
2 gate是可以移动，但是如果没有必要，建议还是不要移动。这样实验的可比性更好。
3 分析直方图时每个标本的mark原则上是应该一致的，但也不排除少数情况需要调整，这主要是看同型对照的位置，假如同型对照的位置发生明显的偏离，说明则需要调整mark的位置，否则，为了前后一致，还是保持一致。
做得太多，我已经记不清楚CD62P的结果了。

园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8

UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态离线

发表于 2012-1-20 10:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在做HELA细胞的thymidine双阻断同步化,准备用流式检测细胞周期,为什么我送检的细胞总是碎的特别多,有没有哪位大侠指点一下如何收细胞?谢谢

===============================================================================================================

我们实验室也有用thymidine双阻断的方法（2mM thymidine for 18hrs, then release for 8hrs, then 2mM thymidine again for 18hrs)来同步细胞，但是好象效率很低，一般同步到M phase的细胞只有30~40%左右，不知了了朋友的结果怎样？

气泡[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 77464
精华 0
积分 258
帖子 236
信誉分 100
可用分 1946
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态离线

发表于 2012-1-20 10:51 资料个人空间短消息加为好友

小中大

isotype是阴性对照还是同型对照呢?两者有何区别?

了了[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 73224
精华 0
积分 367
帖子 453
信誉分 100
可用分 3031
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态离线

发表于 2012-1-20 10:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大