小中大非常感谢，我还有一个问题请教：
1、绿色荧光蛋白在转质粒后在细胞可以发光多久？
2、我打算做双标，那么两种一抗应如何加，是同时加还是做完一种以后再加另一种？
3、我要用转了绿色荧光蛋白的细胞来做另一种荧光检测，目的是进行两种荧光同时检测，会不会影响绿色荧光蛋白的检测，最好应如何处理，采用哪一种荧光抗体最好？我的检测对象为包浆蛋白？谢谢！
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1. 绿色荧光蛋白GFP只要蛋白不降解,荧光不会萃灭.若做稳定表达,那就可以随时观察荧光,但做稳定表达时程很长;若做瞬时表达,在转染后48小时左右应该就有GFP表达,可以观察荧光.
2. 做荧光双标,一抗可以同时加,二抗也同时加.但是,两个一抗要不同种属来源,两个二抗用不同的荧光标记.比如说,第一个一抗为鼠抗A(单抗),第二个一抗为兔抗B;第一个二抗为抗鼠IgG(cy2标记,绿色荧光),第二个二抗为抗兔IgG(cy3标记,红色荧光).在荧光显微镜下观察时,可以在同一个视野分两次激发观察,并分别照相,再将两次照相叠加.这样可以在同一个细胞内,观察抗原A和抗原B的亚细胞定位.
3.用转了绿色荧光蛋白的细胞来做另一种荧光检测,不会有什么问题.最好用cy3标记的二抗去染另一种蛋白.因为绿色和红色的差别很分明,二者叠加又是黄色的信号.
我说的cy2标记的抗鼠IgG和cy3标记的抗兔IgG在KPL公司有买.
