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标题:[分享帖]流式图片专区

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发表于 2012-1-19 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不用客气。
我没用过TRITC做过双标。它是发什么颜色的荧光？
做荧光染色一个关键的问题就是有的荧光素（如cy2）很容易萃灭，所以在其后的步骤中应尽量避光；染色完后尽早在荧光显微镜下观察并照相；荧光显微镜下观察时，室内也要关灯，并尽量减少在激发光下的照射时间。

想起一个问题——你是如schoman所说的那样，在转染了GFP的细胞中作除了GFP以外的另两种蛋白的免疫染色吗？
要是那样，就不能按我前面所说的那样，用绿色荧光做双标了，因为GFP也是绿色的。
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发表于 2012-1-19 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

TRITC为红色荧光（罗丹明）。我已经注意到你提到的事（想起一个问题——你是如schoman所说的那样，在转染了GFP的细胞中作除了GFP以外的另两种蛋白的免疫染色吗？
要是那样，就不能按我前面所说的那样，用绿色荧光做双标了，因为GFP也是绿色的。） 但同样感谢你，非常的热心，应向你学习。
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发表于 2012-1-19 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问哪位大侠知道如何以流式细胞仪检测细胞核内蛋白。上次问过BD公司的工程师，说需要将核膜打孔，不知有没有人做过？具体方法如何？效果怎样？
另外以流式细胞术怎样测定进行所需检测物质的定量研究？（不是做细胞亚群分析）
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发表于 2012-1-19 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
流式仪检测细胞核内蛋白我也没有检测过，但是应该是按照BD工程师所说进行固定穿孔，这种检测和细胞内蛋白的检测方法差别不大，应该是有现成的方法可以参考。
进行检测物质的定量最简单的方法就是统计检测蛋白的平均荧光强度。常用的流式检测统计方法：一个是阳性率，另外一个就是平均荧光强度，平均荧光强度是一种观测蛋白表达相对定量的简单常用方法。细胞表面表达的蛋白越多，其结合的荧光标记抗体越多，因此其平均荧光强度就越高。进行这种方法检测要求每次流式检测的机器条件要完全一致，并且整个试验过程不能拖得太长，因为随着时间的推移，即使前后使用的仪器条件完全一致，但是机器本身的效能也会改变。我曾经观察过，仪器经过半年时间其效能就要发生明显得改变，需要进行光路的调整。因此，最好整个试验过程不要超过半年，否则前后的可比性就较差了。
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发表于 2012-1-19 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这里提供几个流式细胞方法学的网站，关心流式检测的可以从中获取一些知识。
1 联科生物的流式网站cuturl('http://www.gotofcm.com/')
有很多试验操作步骤，可供大家参考。
2 美国BD公司的中文网站，国内流式的老大。
cuturl('http://www.bd.com/china/')
3 晶美生物
cuturl('http://www.jingmei.com/site/site/practice/practice.htm')
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发表于 2012-1-19 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
上面一个很长的幻灯片将其分成14部分，下载后，不知为啥自动加了一个前缀，请将其改为FLOW CYTOMETRY.part01、FLOW CYTOMETRY.part02、FLOW CYTOMETRY.part03。。。。。。等形式，即可以解压缩。
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发表于 2012-1-19 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关于流式细胞检测后的统计学处理

常常有人在检测完细胞后问我如何进行结果的问题。

常见的检测结果如有明确的分组和例数，例如有人检测患者在治疗前后淋巴细胞免疫分类的变化，如果各检测了50例，可以按照常规的统计学方法，如采用配对T检验进行统计处理。

常常见到的是另外一种情形，如有人检测一种药物或者转基因后对细胞周期的影响，或者某种物质对细胞一种蛋白表达的影响。像这一类实验，常常仅仅有实验细胞和对照细胞，在得出结果后，有人喜欢进行统计学处理，还有人不进行统计学处理，仅给出典型的流式检测图进行描述。两者都可以，但是要求是必需重复实验三次以上，否则，不可能进行统计学处理。对于后者，尽管不进行统计学处理。但是必需说明，重复多少次，结果基本一致。
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发表于 2012-1-19 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
以下是群友在干细胞讨论组给我的答复，我贴过来与大家共享。
实际上人、大鼠的MSC具有许多相似的特点。
不表达分化相关的细胞标记如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原及碱性磷酸酶或osteopontin,也不表达造血干细胞系的表面标志，如脂多糖受体CD14 、CD34 以及白细胞表面抗原CD45等。
但表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124、CD166和多种表面蛋白。
在骨髓中同时存在MSC和MDSC（骨髓源基质细胞），都有贴壁性。他们的区别如下
MSC用密度1.073的Percoll梯度离心获得，MDSC用密度1.077的Ficoll-Paque梯度离心获得.
体外培养原代和一代的MDSC包括的细胞是非均质的，有造血干细胞和基质细胞。而原代和一代的MSC却是同质性的成纤维样细胞。MSC 和MDSC都表达SH2 和SB10，但MSC不表达CD14和CD45，而MDSC表达CD14和CD45，原代和一代的MDSC和MCS 都不表达CD34。

来源于脐血培养后出现的贴壁细胞有两种表型
1、破骨样细胞表达TRAP、CD45、CD51/CD61。
2、间充质样细胞表达SH2、SH3、SH4 ASMA、MAB1470、CD13、CD29、CD49e.这与骨髓MSC完全一致。
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发表于 2012-1-19 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你的流式细胞技术幻灯下载后有多大，是4.2M吗？为什么14个rar文件逐个解压后是一样的？或许我做的不对，请指教。谢谢！
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发表于 2012-1-19 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用WinRAR解压，直接解压第一个文件即可，不必逐个解压。
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