小中大大家好！我用流式检测血小板活化标志物----CD62p以及MPA（血小板-单核细胞聚合物）。
我查阅不少资料，总结全血法双标测血小板活化的步骤如下，请您指正！
1，采血抗凝，血液以9：1与抗凝剂（3.8％枸橼酸钠）混合；
2，等体积多聚甲醛固定（终浓度1％），室温孵育10－15min；
3，PBS洗涤一次（2000rpm×5min)；
3，取试管2只，均加入5ul 全血和100ul BSA－PBS缓冲液；
4，标本管加入10ul CD62p－FITC以及10ul CD42b－PE，对照管加入10ul IgG1－FITC以及10ul CD42b－PE，室温避光孵育30min；
5，加1ml PBS，上机检测。
6，用CD42b表达量和侧向散射光（SSC）设门来选定血小板；
7，做对照管，调节阳性区的假阳性率为1－2％；
8，做标本管，得出CD62p的平均荧光强度，及CD62p的阳性百分率。
而今问题是：
1，洗涤时用全血还是静置后上清？如果后者，与富血小板血浆法有何区别？
2，CD42b阳性率不高，它可否作为血小板设门的抗体？我知道常用的有CD41和CD61。
3，先标记后固定的标本可保留几天检测？
烦请各位赐教！谢谢！切切为盼！
