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标题:[分享帖]流式图片专区

glass[使用道具]
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发表于 2012-1-19 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的实验需要检测人内皮细胞表面的黏附分子ICAM-1、VCAM-1。今天跑了一家医院的细胞仪实验室，由于他们没有这种抗体而未能完成我的实验，自己购买这种抗体价格比较贵，而且肯定用不完。不知你处是否有这种抗体。有没有可能我去你处完成我的实验？
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-1-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现有的问题是CD62p的阳性率表达过高。通常文献急性心梗组10－20％，而我的数据可达50－60％。是否为体外激活所致？请教应该如何改进？
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发表于 2012-1-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很抱歉，我这里只有鼠的ICAM-1和VCAM；人的只有ICAM，没有VCAM。
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发表于 2012-1-19 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
血小板检测时确实应注意活化问题，你可以参照我前面一个帖子里检测血小板方法的附件。我提示一下：
1 每次取血的时间和过程尽量一致
2 每次的处理也要尽量一致。
3 取病人血时，同时取一个正常人，同样条件处理，如果正常人也活化非常多，可能是人为所致，否则，说明方法没问题。
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发表于 2012-1-19 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问我要测细胞内细胞因子分泌的情况。要注意些什么问题？我上次做的时候，发现表达率都很低。是不是因为打孔的问题？有什么指标能检验打孔的效率吗？另外，固定的时候用多聚甲醛和甲醛有什么区别吗？
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发表于 2012-1-19 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的大虾：

请问作红细胞表面CD分子的流式检测

须注意哪些方面？

包括红细胞的分离，固定，离心速度等等！！

谢谢！
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发表于 2012-1-19 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
红细胞我曾经检测过多种分子，方法简单，采用FSC和SSC设门可以区分红细胞。
一般采用直接标记的抗体可以取得较好的检测结果，操作不难。
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发表于 2012-1-19 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1,散点图经常被划分成四个象限，如何根据X，Y轴来解释结果
2,亚二倍体是不是调亡的标志，有时峰值图上出现八倍体说明是什么现象
回复：
1 散点图根据 x、y轴分为四个象限，分别表示为UL（上左）、UR（上右）、LL（下左）、LR（下右）。UL区为Y轴阳性细胞，LR为X轴阳性细胞，LL是双阴性细胞，UR是双阳性细胞。
2 八倍体很少见，一种情况是确实存在，如肿瘤细胞等。令一种情况是细胞聚集在一起的细胞团，后者流式可以区分。
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发表于 2012-1-19 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我上面提到进行流式细胞内检测的一篇文章。这里进行一下评论。
看着这样一篇发表在中华风湿病上的文章，我真的感到很诧异。
这里我将作者的检测结果的一副图摘录下来，前面我提到采用散点图根据 x、y轴分为四个象限，分别表示为UL（上左）、UR（上右）、LL（下左）、LR（下右）。UL区为Y轴阳性细胞，LR为X轴阳性细胞，LL是双阴性细胞，UR是双阳性细胞。
有眼力的同志很容易看出在这样的图上很难区分X轴Y轴上的阴性、阳性细胞。
根据我的经验判断，这种结果表明作者在刺激时PMA根本就没有作用，因为一般来讲，PMA刺激其IFN是应该明显升高的，而作者的图上显示，根本没有明显升高，可以比较一下我的附图，我不明白流式检测时到底是如何来定阴性标准的。
这样的结果，实在不太好。


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发表于 2012-1-19 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

既然上面我再次提到了细胞内因子的检测。我就继续述评一下，希望对准备进行细胞内细胞因子检测的站友有所帮助。
细胞内因子的检测牵涉到细胞培养、细胞固定、细胞穿孔多个环节，需要小心操作，好在有现成的试剂盒和Protocol可以参考，我感觉，只要选用好的试剂和抗体，还是能取得较好的检测结果的。
这里我要声明一点，国内发表的采用PMA和离子霉素刺激后来检测Th1和Th2的结果，我私下认为大多数结果是不可靠的，最主要的原因就是因为采用CD4标记Th细胞，然后采用CD4设门，无法准确的定量CD4阳性细胞。
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