细胞世界

请问：流式细胞术能否检测结肠标本？我想测结肠肌间丛cajal间质细胞凋亡以及stem cell factor（SCF)含量。谢谢
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流式细胞术检测细胞是比较好的，组织必须进行酶消化等处理，使其成为单细胞，因此不论是何种组织作流式检测都存在这个问题，操作起来比较麻烦。另外，冻存的组织解冻后细胞很容易破碎，一般不再适宜进行流式检测。
结肠肌间丛cajal间质细胞位于结肠组织内，含量少，很难将其与其他细胞区分开来，因此单纯检测这种细胞比较困难。如果
凋亡检测可能不是很难，采用Tunel方法可以检测（免疫组化，有试剂盒），最关键的还是如何区分是结肠肌间丛cajal间质细胞的凋亡，还是其它细胞的凋亡。
stem cell factor（SCF)含量很少，检测比较困难，没有经验，觉得采用免疫组化可以试一下，或者干脆组织匀浆后进行Elisa检测。

请教：观察药物作用12h、8h、4h、2h对靶细胞的影响。可以同时培养细胞，12h的药物先加入培养细胞中，过4个小时后，加入药物预定观察8h的细胞，那么4个小时后的细胞无论是细胞数还是细胞状态不是和4小时前的细胞不一样了吗？越到后面，细胞的起点不是差得更远了吗？细胞不在同一起点，能观察时效关系吗？
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其实即使你反向加入等到你收集的时候12小时的细胞肯定和4小时收集的细胞也不一样多。细胞的多少和生长状态对于实验结果可能会有影响。如果有影响，可以采用这种方法：传代时12h的细胞加入的多一些，8h、4h的细胞少一些，这样可以平衡一下。只要细胞是处于对数生长期，不要完全铺满造成接触抑制，我觉的一般是不会影响的。

小弟以前没接触过流式，有谁做过用流式细胞仪检测小鼠T细胞Fas、caspase8、3的吗？
急！
盼回复！
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Fas和FASL位于细胞表面，采用FITC 等荧光素直接标记的抗体检测非常容易。可以直接向代理商 订购抗体。
CAspase 8和3位于细胞内，细胞需要进行固定穿孔，常用的固定穿孔剂有Pharmingen公司和Caltech公司的产品，国内分别是基因公司和联科公司代理。可以向他们订购。Pharmingen公司还提供caspase的整套流式检测试剂盒，检测效果要好于自己建立的方法，推荐采用整套试剂盒。
对于单参数的检测一般采用直方图而不是散点图，分析其阳性率和平均荧光强度。