细胞世界

我的课题经费有限,大概得控制在2500以内,老板没钱又什么事都不管,感觉我就是个没人要,没人爱的孩子.
目前我打算做有关血小板活化的课题.打算买CD62P-FITC请问是否可行.
1.实验用的鞘液是否需要购买?
2.如果我要用FITC,是否需要先打听学校的仪器支持这种标记否?
3.有文献说最后要调节细胞浓度为1×10的7次方,如何调节?

万分感谢!

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1 买CD62P-FITC应该可行。
2 实验用的鞘液无需购买，用蒸馏水替代没问题。
3 没听说流式不能检测FITC的，检测应该没问题。
4 加入的抗体标记的细胞（指血小板）不能超过10的7次方。这个简单，用血球计数仪技术一下即可。我推荐你每个检测用的量不要超过10UL，应该可以。
5 我最近的总结发现，检测血小板受的干扰很大，最重要的问题是如何设门区分血小板，因为血小板小，和杂质分部开，这个问题最好的解决办法是另外加入一个血小板标记抗体，如：CD41或者CD61。采用双标记法，即另外加入一个CD41的抗体，如：PE标记的CD41。
6 另外血小板活化检测受很多影响，要求实验条件尽量一致。

我觉得可以。请注意以下几点：
实际上使用的血非常少，可以减少取血的量。
采血
EDTA抗凝采血（枸橼酸抗凝不是很合适。），取后段血。因前段血中可能有组织液存在，造成人为血小板活化。

请问，待检标本固定或不固定，结果有多大影响？
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标本固定后由于固定剂的影响，可能会干扰抗体与抗原的结合。这种影响受使用的固定剂不同，影响也不一样。具体所受的影响不同的抗原和抗体并不相同。常使用的多聚甲醛比较温和，影响较小。
所以新鲜的标本更容易检测到抗原。但是固定后可以延长标本的保存，所以还是很有用处。

刚提到过TUNEL，我最近恰好也要做TUNEL和PI 双染，但由于试剂盒比较贵，所以希望能尽量减少由于摸条件造成的浪费。根据文献和KIT 上提供的PROTOCOL，似乎要准备5个对照样品。分别是：1：cell only 2: untreated cells + lable and enzyme 3: cells+lable without enzyme 4: cells +DNase + lable and enzyme 5: cells +PI without lable and enzyme. 这里请教schoman学长，它们分别代表什么呢？一定要做吗？多谢了，先！
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Tunel试剂盒采用流式检测并不容易，我曾经进行一些实验，但遗憾的是没有得到很满意的结果。所以我感觉流式方法检测难度还是不小，因此我觉得还是严格按试剂盒操作步骤进行为好。
另外你提到的是Roche公司的碱性磷酸酶试剂盒，我感觉该试剂盒主要是用于组化的方法，免疫荧光或流式可能会因为检测敏感度较低而受影响，组化方法由于采用Ap放大系统，比较容易检测，但是其缺点是不能准确定量凋亡细胞的百分比。
在试剂盒中并没有要求做你上述的对照，我觉得还是作一下更好。
1 单纯细胞对照
2 未诱导凋亡细胞进行标记和加入酶（我觉得这里enzyme指TdT酶）
3 细胞进行标记但不加入酶
4 细胞加入DNAase是为了诱导明显的凋亡，应该是作阳性对照。
5 单纯PI染色，这是设对照用。