细胞世界

再次向您请教!
       我想一次上机操作多收集些病人血样,所以想存放一下标本.您看应该采取下列哪个方案:
         
       1. 全血--固定--4℃存放多长时间--加抗体
        2.全血--固定--加抗体--4℃存放多长时间(4℃温度是否合适?)
      或请您推荐一种方法.


第二种方法标本可保留3天。第一种方法如果采用富血小板血浆检测，有关资料提及可存放5天。建议你自己试几管。
了了前辈，您的意思如何？
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没有做过具体试验，文献报道可能是这样的。

我的细胞经70%乙醇固定，-70度保存两周后，发现固定细胞已结冰，请问对细胞周期和凋亡分析有无影响？
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只要细胞没有明显破坏，影响不大，是可以的。

小弟正准备做FCM，有几处不明，想向您请教：
1.培养细胞的固定方法各家报道不一，有的用甲醇，有的用乙醇，还有的用甲醛等，我想知道一般应该用什么固定，固定多少时间？
2.我看文献上经常用PI和RNAase A来复染细胞核，请问二者各是什么作用，为什么有些不用复染？
3.要是做免疫荧光化学，增加细胞膜的通透性用Triton-X-100还是soponin好呢？
不好意思，问您这么多问题，先多谢了！

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多聚甲醛的的固定相对温和，用1-4%左右的常用，一般固定至少10min，我有时用1%的多聚甲醛一直固定直到使用。
75%乙醇常用于细胞周期染色的固定，甲醇用的相对较少，我记得戊二醛也是固定剂，但详细的区别，我说不太清楚。
PI染色是用于细胞周期的分析，75%]的乙醇固定细胞后，通常置于4℃保存，固定的目的是在于细胞穿孔，PI进入细胞内对DNA进行染色，细胞周期的分析是根据各个期的细胞含DNA多少进行确定的。简单的说就是G2M期的DNA含量是G0G1期的两倍，而S期介于两者之间。由于RNA同样会被PI染色会干扰检测，所以要加入RNA酶以去除RNA。我认为不用复染是错误的 ，或者说是不准确的。
免疫荧光化学染色我两者都曾进行实验，感觉都可行，文献说soponin的固定穿孔作用相对温和，对抗原抗体的影响小，因而常用。

转染egfp的细胞占用了一个荧光通道，nse只能采用PE或其它标记的抗体（FITC标记不行）。不知你加入罗丹明有什么用处？