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标题:[分享贴]细胞培养减少污染的小细节

缘yuan[使用道具]
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21
 
我感觉细胞培养,要时刻注意无菌观念。
首先,培养台要提前做好消毒,我们一般是至少紫外消毒30min,使用前,用酒精擦拭一下桌面
其次,关于带不带手套的问题,我倾向于不带,因为我养细胞都没带过,只是用酒精进行擦拭双手。
还有,所有转移到超净台的物品都要用酒精擦拭,包裹之类的可以用喷壶喷一下酒精。
还有,最好用火焰烤烧瓶口

以上只是我个人之间,欢迎拍砖
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实验室内说话是无法避免的。但是坐在净化台前要尽量避免说话。
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谢谢LZ和一些下面的战友的忠告,我刚养细胞,收益匪浅。另外我想问一下,为什么我养的乳腺癌原代细胞用1mg/ml的胶原酶I消化后3-5天都不贴壁?而且很多杂质,不知道怎么去除。
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没污染过,不知道啥时候开始全实验室污染了支原体,刚刚白搭了2个月,郁闷中
支原体恐怖,大家小心

==============================================================================================================

这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。
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没污染过,不知道啥时候开始全实验室污染了支原体,刚刚白搭了2个月,郁闷中
支原体恐怖,大家小心

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这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。
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没污染过,不知道啥时候开始全实验室污染了支原体,刚刚白搭了2个月,郁闷中
支原体恐怖,大家小心



这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。
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没污染过,不知道啥时候开始全实验室污染了支原体,刚刚白搭了2个月,郁闷中
支原体恐怖,大家小心



这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。
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没污染过,不知道啥时候开始全实验室污染了支原体,刚刚白搭了2个月,郁闷中
支原体恐怖,大家小心

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这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。
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很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这极端错误
个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精,
有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。
拿培养瓶和培养液时候请托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。
每天实验开始时候,超净台/实验间 照20分钟紫外是不错的选择
有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染
尽量避免操作时候说话,尤其是严禁细胞房打闹说笑。
每天观察细胞状态,不要总想着save,而是发现细胞不对劲(比如生长缓慢)就立即扔掉。有些(比如支原体)污染,镜检是看不到的,但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常,那么请扔掉,同时由于支原体空气传播,请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。

注意:很多人有个误区,认为进口血清都是贵,其实不然。GIBCO的 NCS,马血清,都比国产的便宜的多,质量好的多。只有FBS才很贵,
很多时候国产血清往往是污染源,所以用国产血清要严格监控状态。

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说说我们实验吧
戴无粉手套,从来不喷酒精,更不用洗手,也不见污染啊。
实验说笑自如,细胞在超净台里呢,有什么影响啊?
最重要的是细胞室里里外外都要干净,我们紫外都照30分钟以上。
我们的实验经验是,国产的四季青血清比进口的GIBCO便宜货好,而且也比它便宜。
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这位老师,我一直很好奇支原体污染是怎么样的。可否告诉支原体污染的现象,以及检测方法。谢谢。

另外,用酒精灯烧瓶口起不了什么作用。那点瞬时温度,我觉得不足以烧死细菌。很多瓶口甚至还有残留水珠,那点温度都不至于让水沸腾,如果水里有细菌,能烧死么?养细菌的标准操作,比如接种环,是要烧到变红,而推平板的玻璃三角棒,是要蘸了酒精以后,直接点燃。所以关于酒精灯在养哺乳动物细胞方面的使用,我觉得不是那么重要。

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在没有超净台的时代,酒精灯的周围是被认为无菌的,我们的老一辈们就是在这样的环境下做过来的。现今有超净台了,再放入一个酒精灯,被认为是加了一个双保险。关于酒精灯的讨论,本版有很多,甚至好像还有一个精华帖,您可以看看。

我觉得您不能用培养细菌的标准来要求培养细胞过程时的无菌处理,因为细菌的数目不是一个两个数量级的,1个细菌烧一下可能就死了,1000个估计就得多烧几下了。
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