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标题:[分享贴]细胞培养减少污染的小细节

baidukk[使用道具]
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我们实验室细胞室操作室是戴上橡胶手套,然后喷上酒精,再用纱布擦干手套,目的是擦掉滑石粉。
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woshituzhu[使用道具]
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呵呵,还是小心点的好,要有强烈的无菌意识。我养细胞从来不戴手套,我们细胞间条件也不是很好,但操作时一定要认真,打开瓶盖之前一定要烧烧瓶颈,然后再打开,打开后再烧烧,尽量在酒精灯前操作。我一直是这样做的,很少污染。
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loli[使用道具]
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不是很同意楼主的意见。我养细胞从没污染过,从肿瘤细胞到间充质干细胞到神经细胞,一直很成功。现把我的程序说说,希望给学弟学妹一点经验:
1、注意实验室卫生,每周消毒液拖地板一次,擦所有工作台面一次。
2、实验前,实验室、生物安全柜紫外消毒。
3、进入实验室,穿隔离服,戴口罩帽子,戴手术手套。
4、实验中,注意各种细节,不能污染。
4、实验前后,细胞培养瓶一定要烧瓶口。

最后,个人经验:细胞长得慢的,可提高血清浓度;细胞老化快的,可减少血清浓度。

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现在好像已经很少有人再烧瓶口了吧,没啥必要。隔离服,口罩帽子,拖鞋,手套也统统不用。只要保证3点就行:
1、实验用的培养皿是一次性的。
2、进口血清和液体培养基,实验前一混合就行了。
3、实验室内地面每天清洗1次。
我看国外的细胞培养间根本就没有酒精灯之类的火源。实验员也很少穿白大褂,更别说帽子口罩了。但是却极少污染。唯独以上三点我在国内的实验室不同。
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我们试验室做细胞试验都是便装的,我觉得关键就是操作谨慎都没多大问题。本人也染过几次菌,不过事后查明是由于培养基配置的问题。所以我觉得配培养基一定要仔细,配完一定要做好测试才能放心使用。。
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duoduo[使用道具]
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支原体污染的细胞应该扔掉
超净台的东西越多飞沫就越多
不能因为一段时间没有污染就放松紧惕
因为有的实验室养细胞还是用双抗
污染会潜伏很久
随便操作的后果很不堪
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yychen[使用道具]
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谢谢各位的经验,我最近也开始养细胞,污染了几次,跟师兄师姐们学习经验,发现还是有很多细节是自己没有注意到的。另外带着手套喷酒精进超净台手被烧了好几次,弄得自己现在缩手缩脚老怕污染。就其原因还是觉得自己在操作时的无菌意识不够强,在超净台东西乱放不说 ,还在养细胞的培养皿上晃来晃去, 不污染都是奇迹啊!希望自己的教训能让大家的细胞养的更好!

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为什么要戴着手套喷酒精呢?通常保险起见是洗手后喷酒精消毒然后戴上无菌手套就可以了。如果是生物安全柜,紫外消毒以后里边空气是很无菌的,不用也不能点酒精灯。我们通常把不能紫外照射的比如试剂一类的瓶子就用酒精擦一遍然后就带进去。这样开始连续做了两年(中间包括6-9月份也没停)到毕业细胞系也没污染过。个人觉得无菌控制里边操作台内的空气质量和个人的无菌操作是最重要的两环。无菌的意识从一开始就要绝对重视,养细胞可能就很好了。
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乌贼老弟[使用道具]
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这些问题在国外都不是问题..............
很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这极端错误
个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精,
(国外本来就是要熄灯到手臂弯以上的,而且冬天也要打肥皂,酒精灭菌)
有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。
(都是有专门实验服套换的,有专门的灭菌前室悬挂衣服,都是紧袖口的蓝色的手术服)
拿培养瓶和培养液时候请托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。
(。。。。。。。。。想象不到怎么会这样操作i)
每天实验开始时候,超净台/实验间 照20分钟紫外是不错的选择
(这里都是灭菌过夜的,uv灯是不关的)
有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染
(不怎么少,翻到很多,一个实验室就2台子,一会儿就用完了)
尽量避免操作时候说话,尤其是严禁细胞房打闹说笑。
(大家都忙死了,还有机会说话啊)
每天观察细胞状态,不要总想着save,而是发现细胞不对劲(比如生长缓慢)就立即扔掉。有些(比如支原体)污染,镜检是看不到的,但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常,那么请扔掉,同时由于支原体空气传播,请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。
(我们是这样的,一旦污染,立即扔掉所有培育箱离得细胞,不论贵贱,全细胞室完全消毒。。。。。。开全体大会严厉批评,二次犯法者,终身不得下细胞室)

注意:很多人有个误区,认为进口血清都是贵,其实不然。GIBCO的 NCS,马血清,都比国产的便宜的多,质量好的多。只有FBS才很贵,
(全部国外购买的,这里比起国内穷多了)
很多时候国产血清往往是污染源,所以用国产血清要严格监控状态。
(每个月换新,使用的快的话,都是2周内换新的)
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toy[使用道具]
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感觉自己作实验,养细胞很马虎,从来不会特意去洗手,一般会用酒精喷一下,的确带手套,可是不会为了进细胞室特别换手套。
不用酒精灯。穿白大衣是为了保护自己。
曾经取老鼠细胞,忘记在细胞室里取,就在普通的试验台上做,然后拿去sort,还是没污染。养了5年细胞了,从来没污染过。
偶尔一次遇到细胞状态不对,继代换液后就好了。
感觉培养液里一般都加抗生素啊,很强悍的。
看看这帖子,很惭愧啊。
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guagua[使用道具]
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耐药细胞,只要注意不要偷懒污染一般不会,耐药细胞一般到一定浓度后及其容易污染
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zhezhe[使用道具]
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细节最重要!在从冰箱中拿出物品后要用酒精擦拭后再放入超净台,防止冰箱中的孢子污染带入超净台。
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