细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [分享贴]李晶教授提供：细胞冻存、解冻方法与细胞计数

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 27  2/3 ‹‹123››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[分享贴]李晶教授提供：细胞冻存、解冻方法与细胞计数

baidukk[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77444
精华 0
积分 803
帖子 1226
信誉分 100
可用分 7048
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
11

发表于 2012-1-27 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
文章上说杂交瘤细胞的冻存密度不要过大，否则复苏后不易存活，我们在实验操作中也遇到过类似的问题，刚复苏时感觉细胞状态很好，可是第二天看大部分细胞却死了。
所以在以后的实验中，我觉得可以适当的调整一下细胞密度，看看能不能增加细胞的存活率。
顶部
969[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74241
精华 0
积分 429
帖子 518
信誉分 100
可用分 3441
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
12

发表于 2012-1-27 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在细胞的冻存很简单，不像楼主说的那么麻烦，我说一下我现在所用的细胞冻存方法，甚是简单，而且冻存的效果很好！取生长良好细胞消化后，用血清悬浮细胞，然后缓慢加入10%DMSO，混匀，每管细胞数为3*10^6个，每管1ml即可，然后放入细胞冻存盒(很多公司都有卖的)，置于-80度冰箱过夜，第二天就可以转入液氮中，这个方法百试不爽！
顶部
小螺号[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74175
精华 0
积分 291
帖子 321
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
13

发表于 2012-1-27 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我还有更简单的方法，其实肿瘤细胞系没有那么娇气。我所用的方法如下：配置2*的冻存液。消化细胞后离心收集细胞，然后调整细胞密度，一般是25cm2的瓶子能动村2管左右（1.5-1.5ml/管），标记好之后，用纱布包裹好，然后将其放在液氮上方，注意不要接触液氮，一般是放在液氮罐盖上，这样放置大约45min左右，随后可以放入液氮中长期保存。效果不错的哟。
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
14

发表于 2012-1-27 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
每次细胞复苏,细胞都不能贴壁.过几天后就都死了.都不知道是什么原因?
请高手指教!
顶部
@STAR@[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74483
精华 0
积分 464
帖子 506
信誉分 101
可用分 3456
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
15

发表于 2012-1-27 14:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
个人观点：每个实验室的冻存方法和冻存液的配方（包括解冻），或多或少有差异，但却是每个实验室的老师多年总结适合自己的方法，当然，老师的方法不一定完全正确。但要尝试一种新方法，就要对比，当证明新方法比老师总结的好的时候，也要和老师交流，而不是盲目的觉得他人的方法就一定比自己的好。适合自己的才是最好的！
顶部
moonlight[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76228
精华 0
积分 194
帖子 187
信誉分 100
可用分 1611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
16

发表于 2012-1-27 14:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位战友大家好！

我想请教大家一个问题：复苏的细胞，是一次性将复苏细胞加入预先温热的培养基中好呢，还

是将培养基少量多次分加好呢？
顶部
生物迷[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73538
精华 2
积分 930
帖子 1192
信誉分 104
可用分 6986
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
17

发表于 2012-1-27 14:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位战友大家好！

我想请教大家一个问题：复苏的细胞，是一次性将复苏细胞加入预先温热的培养基中好呢，还

是将培养基少量多次分加好呢？
顶部
缘yuan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 72882
精华 0
积分 218
帖子 176
信誉分 100
可用分 1626
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
18

发表于 2012-1-27 14:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
因为有时实验很多，把冻存的细胞放在4℃或-20℃就忘了，损失很大，所以现在采用有盖的泡沫盒子，将冻存管直接放在里面，注意不要倒翻，放到-70℃冰箱，第二天在放到液氮里，效果很不错，推荐给大家。
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
19

发表于 2012-1-27 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
运气真是好啊，我一般在4℃30分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜) 这样的情况每次复苏都要看细胞的生命力，强的才能活，弱的直接就挂了。
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
20

发表于 2012-1-27 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚开始养细胞，复苏细胞都是直接就培养基就算了，是不是先离心会比较好？
顶部
 27  2/3 ‹‹123››