细胞世界

现在好多SCI杂志都不认这个实验了，
要求做transwell了。
这个方法无法进行精确定量，前期做起来容易，后期数据处理比较麻烦，还得附图，SCI杂志照片之昂贵，远超过了transwell的价格。

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本人正打算投稿呢，其中就包括划痕实验，能否请wuushark 指点一下哪些SCI杂志不认这个实验呢？

我个人认为选择scratch assay 或者是 transwell assay 是根据所研究的细胞系的特点来决定的。
上皮细胞，癌细胞，角质细胞，在生理状态下，形成单层或者复层上皮，当病理状态下，比如创伤愈合，细胞迁移的时候，以侧向运动为主，scratch assay 很好的模拟了这种运动形式，是很好的模型。
neutrophil, monocyte/macrophage, mesenchymal stem cell, 这类细胞在生理状态下并不形成monolayer, 病理状态下的细胞迁移是在细胞因子或趋化因子的影响下在基质中纵向运动，transwell assay 模拟了这种运动形式，是适合的模型。

本人正打算投稿呢，其中就包括划痕实验，能否请wuushark 指点一下哪些SCI杂志不认这个实验呢？

我个人认为选择scratch assay 或者是 transwell assay 是根据所研究的细胞系的特点来决定的。
上皮细胞，癌细胞，角质细胞，在生理状态下，形成单层或者复层上皮，当病理状态下，比如创伤愈合，细胞迁移的时候，以侧向运动为主，scratch assay 很好的模拟了这种运动形式，是很好的模型。
neutrophil, monocyte/macrophage, mesenchymal stem cell, 这类细胞在生理状态下并不形成monolayer, 病理状态下的细胞迁移是在细胞因子或趋化因子的影响下在基质中纵向运动，transwell assay 模拟了这种运动形式，是适合的模型。

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非常同意。其实在伤口弥合中，fibroblast的向创口处迁移就是典型的侧向爬行。但是其实癌细胞的迁移倒不是侧向爬行那么简单，我觉得应该是综合效应，而且要看是什么类型的肿瘤。因为对于远端病灶的转移，显然是通过血液运输的。这是一个细胞去黏附和再黏附的过程。其实transwell也不能很好的模仿这个过程。只是transwell+matrigel可以模仿肿瘤细胞融解基质，侵入到正常组织的这个过程。也就是侵袭。所以对于做cancer的来说，可能transwell会更好些。但我觉得并不能就简单否定scar assay。细胞的迁移作为细胞的一个正常生理活动，是表征细胞生理变化的一个重要指标。这点是很主要的意义。

请教一个细节问题，在细胞划痕之前，加入无血清培养基24小时，然后再进行划痕，划痕后，加入药物进行观察，此时也需要无血清培养基，对吗？但如果这样的话，要观察加药后48小时，就相当于细胞处于饥饿状态长达72小时，这可行吗？

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划痕法，只要是超过一个细胞周期的时间都是要无血清的，防止增值的结果影响迁移实验。如果是在12左右的观察，可以用有血清的。如果细胞不能忍受长期饥饿，你可以加药以后再测迁移率。

最近做细胞迁移模型，划痕效果总是不好，拍出的的照片很难看。我是先用单面刀片在6孔板孔里划出一道痕，再用细胞刮刀刮去一边细胞的。要不是划痕深度难把握，要不就是划痕边缘细胞刮不干净，我看文献上很多人都这么做过的。请教各位，有什么方法造的迁移模型比较漂亮。

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刀片是不行的，会把板子划坏的。用枪头划痕，然后可以用细胞刮刮去另一半。还有要看什么细胞系，有的细胞系是很难划得漂亮，因为黏贴不牢，容易带起来，比如293，Hela，都不能得到很直的划痕。最好用上皮类型的细胞，这种细胞贴壁很牢，梭形的，但长密了又可以呈铺路石状，很容易划出漂亮的直线。次之，纤维型细胞也可以，这种细胞贴壁也很牢，但是长密了以后像纤维般纠结在一起，划痕的话，很容易造成很多细胞残片，和漂浮细胞，一定要洗干净。