细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]细胞划痕实验

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]细胞划痕实验

tangxin_80[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79896
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4621
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-17
状态 离线
21
 

maker笔是不是可以用记号笔代替?我总觉得做实验的用品和器材最好是都准备齐,这样做起来会顺利些
顶部
qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
22
 

为什么这个实验不能测迁移率,我们就是一个孔里在划的十字周围拍照,然后数迁过细胞的个数。最后和control的对比啊。另外我们划线的时候枪头用的是进口的那种枪头,并且划的时候会倾斜一定的角度,垂直的话,在划过的区域中会有残留细胞的。
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
23
 
关于划痕我最近也在尝试,参考了国外的一些书,自己弄了定量模型,不知道到时候发文章的时候外国认不认。

其实划痕很大一个问题就是前后拍照的位置不固定,给药前后的视野固定式一个问题。后来经过指点,发现在板后面标记是个好方法,试验几次后用很小的注射器针头,沿直尺划三条平行线。然后待细胞长满后,划痕同样用直尺比对着与原来板后的先垂直做划痕,一般做三道。这样就会存在内外交叉的9个交点。然后每次拍照的时候用4倍物镜下拍照,取9个交点处。这样最后的图像通过处理可以把两张图重叠,以板后的小针划痕的黑影为基准线。这样就可以得出具体出现迁移的面积。

最后定量就是沿着划痕的方向取义个定长的矩形所框定的里面的迁移面积,这样可以排除不平行的问题,而且这个平均面积也可以等同于迁移的平均距离。有张作好的图,为摸索实验的,做的不漂亮,后面好点,先给大家参考下。

具体图像处理是先用photo shop 将图像合成,再用IPP6.或是DT2000等处理并计算面积。


查看积分策略说明
附件
2012-2-2 17:36
96509257.snap.jpg (25.5 KB)
 
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
24
 
关于划痕我最近也在尝试,参考了国外的一些书,自己弄了定量模型,不知道到时候发文章的时候外国认不认。

其实划痕很大一个问题就是前后拍照的位置不固定,给药前后的视野固定式一个问题。后来经过指点,发现在板后面标记是个好方法,试验几次后用很小的注射器针头,沿直尺划三条平行线。然后待细胞长满后,划痕同样用直尺比对着与原来板后的先垂直做划痕,一般做三道。这样就会存在内外交叉的9个交点。然后每次拍照的时候用4倍物镜下拍照,取9个交点处。这样最后的图像通过处理可以把两张图重叠,以板后的小针划痕的黑影为基准线。这样就可以得出具体出现迁移的面积。

最后定量就是沿着划痕的方向取义个定长的矩形所框定的里面的迁移面积,这样可以排除不平行的问题,而且这个平均面积也可以等同于迁移的平均距离。有张作好的图,为摸索实验的,做的不漂亮,后面好点,先给大家参考下。

具体图像处理是先用photo shop 将图像合成,再用IPP6.或是DT2000等处理并计算面积。

=================================

这位群友,能否提供:
IPP6.或是DT2000的安装程序,谢谢。
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
25
 
真是不错!想问一下,时间点的选择是否一定要在24小时内,以12个小时为单位是否可以?
顶部
2541[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75124
精华 0
积分 742
帖子 1144
信誉分 100
可用分 6580
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
26
 

我有个问题想请问各位大虾:就是为什么要非要将细胞刮掉再来测定它的迁移率呢?为什么不能一开始就限定细胞的生长的面积?我的意思是说刚开始的时候为什么不能用琼脂糖加到PBS里面或者D-HANKS里面,直接做成胶状,待其凝固后,将一部分给刮掉,然后将细胞传到里面, 这样不久可以不用划痕了嘛?不知道这样做有什么不对?请各位指教!
看到有老外是这么做的,不知道可不可行?
顶部
66小飞侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75376
精华 0
积分 466
帖子 651
信誉分 100
可用分 4008
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
27
 
谢谢楼主,照片很漂亮,实验步骤也很清楚。

需要提醒楼主的是:如果你连续监测24小时,你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移,你可以先用丝裂霉素处理一小时,抑制细胞的分裂,这样你的结果就是细胞迁移的作用了。

照片拍完之后,可以用image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

============================

请问一下丝裂霉素的浓度是多少?
顶部
pengke1983[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 78619
精华 0
积分 470
帖子 639
信誉分 100
可用分 3986
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-1
状态 离线
28
 

能提供丝裂霉素的应用浓度吗?
顶部
langlang[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77033
精华 0
积分 668
帖子 976
信誉分 100
可用分 5741
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
29
 

mitomycin C 5~20ug/ml for 1 h at 37C

J Biol Chem. 2003 Jun 20;278(25):22555-62.

Clin Oral Implants Res. 2006 Jun;17(3):321-7.

其他的自己去PubMed 查 keyword : mitomycin C, migration, 100多篇原文。
顶部
zranqi_1[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77471
精华 0
积分 409
帖子 497
信誉分 100
可用分 3298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
30
 
个人认为还是transwell是目前公认的,但划痕法操作简单并且价格低廉,可以应用于抗血管药物的筛选,特别是中药的筛选,比起CAM筛选可能还要方便些.试验的话,条件允许还是用transwell吧.
顶部