细胞世界

感谢楼主的介绍，我也在做相关的实验，由于考虑到将来投稿的问题，所以老板让做transwell实验，下面这个链接是总结Transwell实验的，各位可以参考：cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=7506372&sty=2')

我有个问题想请问各位大虾：就是为什么要非要将细胞刮掉再来测定它的迁移率呢？为什么不能一开始就限定细胞的生长的面积？我的意思是说刚开始的时候为什么不能用琼脂糖加到PBS里面或者D-HANKS里面，直接做成胶状，待其凝固后，将一部分给刮掉，然后将细胞传到里面， 这样不久可以不用划痕了嘛？不知道这样做有什么不对？请各位指教！
看到有老外是这么做的，不知道可不可行？

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老兄，这个我试过。结果是。。。失败。几个问题。
1。细胞会趋向于琼脂那面，造成不均匀。这个可能和表面吸附有关。
2。低浓度琼脂很软不行，高浓度琼脂不知道为什么会让培养基迅速变黄。可能是琼脂不纯。
3。琼脂很不好切割，高浓度琼脂（2%）因为比较硬，在切的时候，会和地面脱离，这样种细胞的时候，细胞就会渗到琼脂下面去。

我也看到老外做过，但自己总是做不出来。

老兄，这个我试过。结果是。。。失败。几个问题。
1。细胞会趋向于琼脂那面，造成不均匀。这个可能和表面吸附有关。
2。低浓度琼脂很软不行，高浓度琼脂不知道为什么会让培养基迅速变黄。可能是琼脂不纯。
3。琼脂很不好切割，高浓度琼脂（2%）因为比较硬，在切的时候，会和地面脱离，这样种细胞的时候，细胞就会渗到琼脂下面去。

我也看到老外做过，但自己总是做不出来。

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这个问题我当时也遇到过，我是这样处理的：
1、首先澄清一下我用的是琼脂糖，而不是琼脂，第一：琼脂没有琼脂糖干净，第二：琼脂的孔径存在问题，用琼脂糖可以大大减少这个细胞趋向这个问题。
2、我用的是0.8%的琼脂糖，这个浓度很好，不硬不软，当然我刚开始也有黄的现象出现，这样：当琼脂糖凝固之后，你先加一定量的完全培养基，等到24小时之后，再将这个培养基吸掉，这个时候再将细胞传进去，可以解决这个问题。
3、切的时候叫个女生来切，说实话，女生干这个比男生好
这样的话，我感觉就可以了，照片我就不上传了。当然，楼主的方法也不错，我也可以试着做一做。

这个问题我当时也遇到过，我是这样处理的：
1、首先澄清一下我用的是琼脂糖，而不是琼脂，第一：琼脂没有琼脂糖干净，第二：琼脂的孔径存在问题，用琼脂糖可以大大减少这个细胞趋向这个问题。
2、我用的是0.8%的琼脂糖，这个浓度很好，不硬不软，当然我刚开始也有黄的现象出现，这样：当琼脂糖凝固之后，你先加一定量的完全培养基，等到24小时之后，再将这个培养基吸掉，这个时候再将细胞传进去，可以解决这个问题。
3、切的时候叫个女生来切，说实话，女生干这个比男生好
这样的话，我感觉就可以了，照片我就不上传了。当然，楼主的方法也不错，我也可以试着做一做。

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谢谢楼上的回答，我还有个问题。就是你铺玩细胞之后，把琼脂去掉的时候，你怎么处理的？很难弄得，我觉得

这个问题我当时也遇到过，我是这样处理的：
1、首先澄清一下我用的是琼脂糖，而不是琼脂，第一：琼脂没有琼脂糖干净，第二：琼脂的孔径存在问题，用琼脂糖可以大大减少这个细胞趋向这个问题。
2、我用的是0.8%的琼脂糖，这个浓度很好，不硬不软，当然我刚开始也有黄的现象出现，这样：当琼脂糖凝固之后，你先加一定量的完全培养基，等到24小时之后，再将这个培养基吸掉，这个时候再将细胞传进去，可以解决这个问题。
3、切的时候叫个女生来切，说实话，女生干这个比男生好
这样的话，我感觉就可以了，照片我就不上传了。当然，楼主的方法也不错，我也可以试着做一做。

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这个琼脂糖怎么灭菌的？直径是多少，大侠指点一下啊!

这个琼脂糖怎么灭菌的？直径是多少，大侠指点一下啊!

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直接称取一定量的琼脂糖，用PBS或者D-HANNKS液调整浓度，放入一个大体积的烧瓶里面，包扎，灭菌即可。用的时候在微波炉里熔化即可用。