细胞世界

这个问题我当时也遇到过，我是这样处理的：
1、首先澄清一下我用的是琼脂糖，而不是琼脂，第一：琼脂没有琼脂糖干净，第二：琼脂的孔径存在问题，用琼脂糖可以大大减少这个细胞趋向这个问题。
2、我用的是0.8%的琼脂糖，这个浓度很好，不硬不软，当然我刚开始也有黄的现象出现，这样：当琼脂糖凝固之后，你先加一定量的完全培养基，等到24小时之后，再将这个培养基吸掉，这个时候再将细胞传进去，可以解决这个问题。
3、切的时候叫个女生来切，说实话，女生干这个比男生好
这样的话，我感觉就可以了，照片我就不上传了。当然，楼主的方法也不错，我也可以试着做一做。

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我想在转染后再划痕，请问您有什么建议吗？多谢多谢

很多战友肯定现在都做过关于细胞迁移的实验。
其中划痕法以其材料廉价，操作简单而多年来一直深受大家的欢迎。

我这里介绍一下我自己的操作过程和结果图。希望能给新来的战友们以帮助。

材料：
6 孔板（其他的也可以，但感觉6孔比较好，大小适中）
marker笔
直尺
20微升枪头（灭菌）
无血清培养基
PBS

准备：
所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）

流程：
1。先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2。在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
3。第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。
4。用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。
5。放入37度5%co2培养箱，培养。按0，6，12，24小时取样，拍照。

下面是照片，细胞NIH3T3
0h

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请问划痕的宽度有什么要求吗， 一般宽度是多少？