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标题:[讨论帖]细胞划痕实验

kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也想做划痕,楼主的照片很漂亮,请问你说的在背后划5条线是不是横着划,然后划痕是竖着划,这样就相交,然后分别测五条线之间缩进的距离,再平均一下??? 还有,为什么图片会有桔黄色和粉色,我照出来的只是培养基的粉色.麻烦帮我解答一下,多谢了!

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我也有同样的问题，楼主照片的颜色是调出来的吗？
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下丝裂霉素的浓度是多少？

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1ug/ml
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utt0989[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问计数迁移的细胞，IPP软件应该具体怎么操作呢
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tieshazhang[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个时间主要是考虑细胞饿得 增殖，要控制细胞的增殖，否则划痕的愈合可能不是由于细胞的迁移造成，而是增殖造成。
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白白的[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我最近也想做划痕,楼主的照片很漂亮,请问你说的在背后划5条线是不是横着划,然后划痕是竖着划,这样就相交,然后分别测五条线之间缩进的距离,再平均一下??? 还有,为什么图片会有桔黄色和粉色,我照出来的只是培养基的粉色.麻烦帮我解答一下,多谢了!!!!!

我也有同样的问题，楼主照片的颜色是调出来的吗？

我是将照相时候的色彩饱和度调到最低
这样就是黑白的了
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

很好的贴，学到了很多。我们实验室最近在做这个实验，但是效果不是很理想。我们只要做的是药物对血管上皮细胞迁移的影响，是划痕后加药，这个药物浓度的设定有没有什么讲究呢？虚心请教各位战友~
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很好的贴，学到了很多。我们实验室最近在做这个实验，但是效果不是很理想。我们只要做的是药物对血管上皮细胞迁移的影响，是划痕后加药，这个药物浓度的设定有没有什么讲究呢？虚心请教各位战友~

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要排除药物对细胞增殖的影响！
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

oncogen (2010) 29, 2130-2141
BAX inhibitor 1 enhances cancer metastasis by altering glucose metabolism and activating the sodium-hydrogen exchanger the alteration of mitochondrial function.
文章里同时做了transwell和划痕，也有介绍划痕结果的统计方法，大家看看吧。
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ququer787[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问各位战友，如果想转染后再做细胞划痕实验，那么要不要先把转染好了的细胞收集起来然后再重新铺板，划线？抑或直接在转染平板上划线？

第二种做法的平板上，细胞的分布会不会不够均匀？
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xue258[使用道具]
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发表于 2012-2-2 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
关于划痕我最近也在尝试，参考了国外的一些书，自己弄了定量模型，不知道到时候发文章的时候外国认不认。

其实划痕很大一个问题就是前后拍照的位置不固定，给药前后的视野固定式一个问题。后来经过指点，发现在板后面标记是个好方法，试验几次后用很小的注射器针头，沿直尺划三条平行线。然后待细胞长满后，划痕同样用直尺比对着与原来板后的先垂直做划痕，一般做三道。这样就会存在内外交叉的9个交点。然后每次拍照的时候用4倍物镜下拍照，取9个交点处。这样最后的图像通过处理可以把两张图重叠，以板后的小针划痕的黑影为基准线。这样就可以得出具体出现迁移的面积。

最后定量就是沿着划痕的方向取义个定长的矩形所框定的里面的迁移面积，这样可以排除不平行的问题，而且这个平均面积也可以等同于迁移的平均距离。有张作好的图，为摸索实验的，做的不漂亮，后面好点，先给大家参考下。

具体图像处理是先用photo shop 将图像合成，再用IPP6.或是DT2000等处理并计算面积。

本人眼拙，没大看懂，请赐教！
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