液相色谱

我使用的是安捷伦1200带自动进样器的高效液相色谱仪，使用C18的色谱柱，流动相为水和乙腈9:1，流速1.5ml/min，单通道等度洗脱，发现压力在122--126bar之间浮动，主峰保留时间后滞。
更换新的玻璃滤头，打开purge阀，四个通道逐一5ml/min排空5min，均无气泡产生，purge阀与自动进样器、自动进样器与柱温箱之间的连接管路也进行冲洗，之后连接双通后，拧紧purge阀，流速2ml/min，压力仍在22--26bar之间浮动，连接双通，用水和乙腈9:1，冲洗管路一夜，也没有好转，连接柱子压力波动反而更大了。
不知是什么原因引起的，望各位老师赐教，感激不尽！


处理前，连接色谱柱的压力图，红色为压力线


连接双通冲洗管路压力图，红色为压力线


处理后，连接色谱柱压力图，红色为压力线

[ 本帖最后由 miracle 于 2012-2-6 14:34 编辑 ]

把溶剂瓶里的过滤头换洗一下看看。

呵呵，让我给你分析一下这是什么原因吧：

1）如果你的是新柱子，那就有可能是你的溶剂瓶脏了，里面杂质多了，保留峰有变化，望多洗溶剂瓶，尤其是水液相溶剂瓶子。。
2）如果是老液相柱子，就换柱子吧 换一根新液相柱子，试试。。

3）由于你使用的多元泵，水相的比例明显大于有机相乙腈，所以水的问题可能最大。。
4）如果用哇哈哈或者屈臣氏水，最好一天换一次，这种水夏天或时间长了最容易变质，轻快换水有可能是解决问题的主要方法，不能老是把新的水往一个瓶子里面老加。
5）仪器在用之前最好多冲一会管路，最好是15分钟左右，因为管路里面的气泡五分钟也有可能冲不出来；流速要有变化，这样有些气泡才能冲出来，不能老是高流速或低流速，速度变化一些，看看效果如何。。
6）最好是流动相混合冲管路，这样就有可能把检测器里面的气泡冲出来。。

7）还有一种情况就是溶剂混合冲气泡是也有可能带入气泡，水相和乙腈混合的时候，两种溶剂就有可能产生气泡，特别是高流速，大流量的时候。。所以冲柱子也是很有讲究的。。

8）液相好像没有问题，有问题压力就不会保持在一定的范围之间，而且比较恒定的范围。。

实验的成功关键在于实验的细微细节，小小的细节决定了你实验的成败。。。不注重细节，实验失败的次数就会增加很多。。。多学习多总结。。多进步

个人之见。。敬请参考。。望有帮助。。

对，还有可能是混合器坏了，没有将混合溶剂的气泡除掉

根据你的现象分析，我认为最有可能是单向阀的滤芯坏了，需要更换。

是purge阀里面的过滤白芯脏了，卸下purge阀，换一个新的，装上后，purge一下，就OK了

过滤白芯已经更换过了，效果没有改善啊。。

首先，柱子如果太旧了，会有这个问题产生，可能是柱填料引起的。
其次，排气时，最好将有机相比例提高，这样才会容易将气泡排出。
看到你连接双通和第三张压力曲线，我认为有可能会是单向阀的损坏引起的。
以上三点供你参考。

压力不稳还有一个原因，泵本身不稳定。可以掐表计时，接一定时间内的流出液体，量体积，反算流速是不是稳定。

个人见解：
1、有可能是你的溶剂过滤头那里有问题。
2、有可能是你的真空脱气没有起作用，进而在高流速的作用下产生气泡。
3、有可能是你的溶液中的水受污染了，换一下别的品牌的水看一下。
4、有可能是你的管路不干净，你试一下先冲半天之后是不是还是这样。
5、还有就是你平衡的时候有点短，平衡久一点是不是还是这种情况。
6、最后才看一下是不是柱子的问题。