细胞世界

积极跟帖。
我培养的是脐动脉平滑肌细胞，用贴块法。
1.要用胎牛血清。开始用的是小牛血清，所以总是不成功，培养基换为DMEM/F12,但后来我又换成DMEM，也培养出来了。－所以作实验特别是新手，刚开始还真得不怕花钱，否则，费时又费力。
2.把脐动脉剪开很麻烦，因为它老是打弯，三木提示可以找个软木塞，用大头针固定，后来我找了块木板，因为有磨擦力，所以动脉可以固定在板上。
3.对于新手来讲，最麻烦的就是把组织快剪成1mm3小块，可以找块磨砂玻璃，切完再剪就好多了。
4.把剪碎的组织快移到培养瓶里，我用了类似牙科的刮匙，直接放进瓶里。加入2ml培养液，一定不能放多，防止漂浮。然后用玻璃分针轻轻将小块分离开。
其他的基本就按文献就可以了，比如，三个小时后翻瓶，换液时保留1/3。
不过，我的细胞总是到2个星期后才开始生长，快一个月了才长满瓶。刚开始长得特别慢，后来就快多了，传完代后就长得更快了。

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我怀疑长的慢的原因跟干涸时间太长有关

各位老大
我以前做过乳鼠心肌细胞原代培养，我有一些心得。
1 ，制备心肌细胞用出生一天的乳鼠最好。
2，制备心肌细胞用试验方法书上的方法，取心尖部用PPS洗清，要剪粹0.1mm，注意器械无菌。
3，培养基有进口的DMEM，用20%的胎牛血清，加双抗，注意操作的无菌。
4，用分次消化法，在此37度的摇床中进行分次消化法，消化时间要把握好，不然大过，吹打要把握好。
5，消化好后直接接种于96孔板中进行试验备用，离心的速度不能大快，否则心肌细胞就会有很多死细胞。
6，我用二次差速的方法来纯化心肌细胞，每次1。5小时，差速后的细胞种在96孔板中并加上一定量的杀非心肌细胞的物质，三天，经研究加五天也行对细胞没有很多影响。
7，心肌细胞有大部分的心肌纤维细胞和心肌细胞，而心肌细胞又分为M心肌细胞和F心肌细胞，我们用于研究用的心肌细胞最好用M心肌细胞，因为M心肌细胞跳动很明显。
8，要很好的把握好试验的时间，等等吧，还有一些我还在记。