小中大我养过SD大鼠的肾小球系膜细胞，现将具体方法步骤总结如下，大家多交流：
试验步骤
一 准备工作:
1 液体配制：
（1） RPMI1640 ;胎牛血清（进口 hyclone 特级）；含15％胎牛血清的RPMI1640(加双抗)；
（2） D-hanks ;
（3） 0.1％Ⅳ型胶原酶；
（4） 10％水合氯醛；
2 器械：（高压消毒：121℃ 20分钟）
（1）外科镊子2把；止血钳2把；外科剪刀1把；眼科剪刀1把；眼科镊子2把；
（2）烧杯（250ml 4个,3个分别用3种网筛封住杯口，4个均用四层砂布包裹）10ml小烧杯；研磨器，50ml塑料离心管。
（3）25cm2培养瓶（进口costar）;
3 37℃ ,5% co2 恒温孵育箱；
4 动物：130－150g SD大鼠2只；
二 具体步骤：
1 无菌取肾： 10％水合氯醛0.5ml腹腔注射麻醉；无菌条件下取肾；并将肾放入预先准备好的装有适量(浸过肾)D-hanks 的平皿中；移入超净台中；该步速度应快；
2 分离肾小球：用眼科镊子将肾包膜剥离去除，眼科剪刀剪下肾皮质，放入预先装有D-hanks的10ml小烧杯中，用D-hanks冲洗三遍，以剪刀将肾皮质剪成糜状；依次将糜状液通过80，150，200目筛网，边研磨边用D-hanks冲洗。最后收集200目筛网面上组织，以D-hanks将之冲至另一烧杯中（最好少于50ml），
3 消化离心：烧杯中液体移入50ml塑料离心管中，1000转离心5min;弃上清。以0.1％胶原酶4ml ,37℃消化10min左右；（离心转数，时间及消化时间是关键）；以等量培养液中和，800转离心5min ,弃上清，以5ml培养液悬浮肾小球，并将其转移至培养瓶中，镜下观察以肾小球结构比较松散为宜；放入孵育箱中绝对静置5－7天（以利于肾小球贴壁）；5天左右观察可见肾小球周围有铺路石子样上皮细胞，大约10天左右可见梭形系膜细胞铺满瓶底，上皮细胞逐渐减少，即可进行消化传代。
