细胞世界

各位仁兄大家好！
能否赐教以下UVA诱导的皮肤角质形成细胞的损伤模型的制作方法！

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找到一个UVB致皮肤角质形成细胞的损伤模型的制作方法。

材料和方法

1 试剂:胎牛血清(北京军医兽医防治中心) ,DMEM培养液(GIBCO ,美国) ,碘化丙啶PI(Sigma) ,Triton2X100 (BDH) ,Hoechst33342(Sigma) ,RNase (Sigma) 。

2 细胞及实验分组:人角质形成细胞株Colol6 (由北京师范大学生物系提供) 。分单纯对照、单纯照射、给药后照射、照射后给药4 组。给药后照射组为在照射前24 h 给药,照射后24 h 进行检测,照射后给药组为在照射后立即给药,照射后24 h 进行检测。

3 紫外光源及照射条件:光源为UVB 紫外灯管(上海金光灯具厂,6W) ,剂量率为6J·m- 2·min - 1 (由吉林大学环境卫生教研室进行测量) 。

4 药物种类:人参三醇组甙、Rg1、Rb1 由吉林大学有机化学教研室提供。

5 细胞周期:胰酶消化贴壁细胞,接种于24 孔平底培养皿中(5 ×105 细胞P孔) ,每孔先加300μl DMEM 培养液(含15 %胎牛血清) ,待紫外线照射后,加至1 ml ,置37 ℃、5 %CO2孵箱中。收集细胞, 0101 molPL PBS 洗2 次, 加RNase (011mgPml) 100μl ,100μl PI(含Triton2X100) 单染37 ℃、30 min 避光保存,用流式细胞仪FACScan (Becton Diskinson ,美国,氩离子激光激发,波长488 nm) 检测,每个样品收集1 ×104 个细胞,数据采集分析软件为ModFit LT。

6 细胞凋亡:加入100μl Hoechst33342 ,再加100μl PI(不含Triton2X100) ,0 ℃、阴暗处放置30 min ,用流式细胞仪收集1 ×104个细胞,Cellquest 软件分析结果。

见：
金光辉,人参组甙对紫外辐射致皮肤角质形成细胞损伤的保护作用
另请参见：
夏济平. 宋秀祖. 毕志刚. 茶多酚对紫外线辐射后的角质形成细胞和成纤维细胞增生影响的保护作用.临床皮肤科杂志 2003年05期

想请教各位高人：细胞模拟缺血再灌注诱导凋亡的模型，我们学校的条件有限，只有三箱培养箱，没有那种缺氧罐，而三箱的氧浓度最低为1%，不能降到为0，而我看到许多国内的文献都用的是95%的氮气，5%的CO2，难道他们都有那种缺氧条件吗，并且如果考虑自制的话，还存在氧分压测量的问题，我觉得太复杂了，不知战友们都是怎么做的？不考虑化学缺氧。

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我用的箱子是自己设计作的～～和普通的箱子没什么区别～～关键就是要密闭性好！！作之前把里面的气体抽出来，再充95%的氮气，5%的CO2，使用测氧仪来测氧分压，确定小于5%即可。

同是天涯沦落人啊
我也在做神经细胞缺氧复氧的模型，用的是乏氧罐，充95%氮气和5%二氧化碳，现在刚养出细胞，订购了混合气体，有几个问题问群友，希望能得到解答：
1.我用六孔板养的原代，缺氧能测什么指标，现在想只有显微镜下看和台盼蓝染色，是否还有别的可以做得指标，反正是预实验，能多做就多做点，希望能有简单的步骤。
2.神经原代能用胰酶消化到96孔板里吗？他们还能贴壁吗？
3.阿糖胞苷-20度能保存多久，我的细胞纯化不好，杂质很多.
先问这几个问题，希望各位大虾能不吝赐教！
万分感谢！！！！

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1.还可以测一些酶来鉴定，比如SOD,MDA等，还可以测NO的浓度才鉴定是否缺氧
2.能贴壁，铺敏就行
3.阿糖胞苷4度保存，不污染可以反复使用。半年没问题。