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标题:[讨论帖]细胞损伤模型

rxcc33[使用道具]
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发表于 2012-2-9 13:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
哪位大侠贡献一下原代皮质神经元缺氧诱导凋亡的方法？药物或气体浓度，诱导时间？具体的方法、步骤？有没有用耗氧剂在密闭小室内诱导缺氧的？万分感激您的帮助！现在急等要做，细胞已经两天了。

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关于用耗氧剂在密闭小室内诱导缺氧的实验我看过相关的报道，但是没有作过，老板不同意。我现在使用的仍然是物理缺氧的方法
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小螺号[使用道具]
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发表于 2012-2-9 13:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助
向各位前辈请教一个问题:用h2o2致pc12凋亡的浓度和时间,另外用含血清与不含学期有何区别?本人摸索了好长时间,还没得到稳定的实验条件,先谢了!
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greenbee[使用道具]
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发表于 2012-2-9 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是醋氨酚肝损伤模型。我的做法是将肝细胞培养24h后，然后换以5、10、20mM的醋氨酚培养液，培养2、4、12、24h后测定MTT。结果发现，12h和24h时，造模的高中低剂量组的MTT值反而较对照组的要高。我怎么也想不明白，请各位大侠指教。
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-2-9 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问有那位高人培养了肾小管上皮细胞(NRK52E),现在想制作缺血再灌注模型,文献很少有报道,如有同行麻烦回复,急急!!

谢谢!!
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-2-9 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
通过改变artificial cerebrospinal fluid(人工脑脊液)成分来造模（培养的皮层或海马神经元）：
ACSF(mmol/l)
NaCL 126
NaHCO3 26
NaH2PO4 1.25
KCL 5
CaCL2 2
MgSO4 1.5
GLUCOSE 10
1.离体缺糖缺氧模型：ACSF中除去葡萄糖并以N2 代替95%O2和5%CO2混合气，造成离体缺糖缺氧模型
2。模拟癫痫模型：ACSF中除去镁离子并加入青霉素或谷氨酸模拟癫痫模型

能否详细些？呵呵
斑竹，其实具体过程我也不是很清楚，这是原来科里一个很强的师姐留下的笔记所记录的，好像是在做膜片钳时所作的模型，仅供大家参考！谢谢
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owanaka[使用道具]
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发表于 2012-2-9 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

双氧水和谷氨酸及天冬氨酸对PC12的损伤模型
H2O2(500μmol/L-1000μmol/L)作用24h,MTT法检测细胞存活率约为40%-70%,Glu(5mmol/L-30mmol/L)作用24h,MTT法检测细胞存活率约为25%-95%,NMDA(100μmol/L-30mmol/L)作用24h,MTT法检测细胞存活率约为30%-80%.仅供参考.
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发表于 2012-2-9 14:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位战友，有没有取大鼠脑组织，体外培养神经细胞后再制造创伤性脑损伤的模型，以前看过有关的气压，牵拉，机械划伤等模型，但很多都是用胎鼠，如果直接用大鼠的脑组织做，神经元又不具增长生长特性，怎样做模型是不是有可行性，怎么做？谢谢
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发表于 2012-2-9 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

内皮细胞损伤模型
一、细胞因子损伤模型
将内皮细胞铺板后待即将单层融合时，换无血清或低血清培养基，加入细胞因子如IL－2，TNF－alpha、IFN等，共同孵育一段时间，或者加入药物与之共孵育，或者加细胞因子之前先加入药物孵育后，再加细胞因子，结束后测一些指标如MTT、LDH、NO、等等看药物对细胞因子损伤的保护作用。也可采用不同的时间、不同的浓度来观察。
二、缺氧－再供氧损伤模型
也是先将内皮细胞铺板后待即将单层融合时，换无血清或低血清培养基，先将细胞置于95％N2和5％的CO2的混合气的缺氧槽环境中注意保持37度的温度，用耗氧仪持续监测缺氧槽中的氧分压，使之保持在0.5 KP左右，细胞在低氧环境中培养一段时间后在移入正常的培养环境，可观察不同的缺氧时间、不同的给氧时间对内皮细胞形态功能的影响，也可结合药物观察，入上所述。
此外，内皮细胞的损伤模型尚有双氧水损伤模型、氧自由基损伤模型、氧化型脂蛋白损伤模型、等等。最后提及一点，楼上说的ox-LDL损伤模型的浓度不是很准确，因为从目前国内外的文献来看，oxLDL（10-50ug/ml）的浓度一般不会损伤内皮细胞尤其是内皮细胞系，如ECV304，恰恰相反，的浓度的ox-LDL会促进细胞的增值，国内有人报道，ox-LDL造成ECV304凋亡的浓度一般为150ug/ml~200ug/ml,也有用100g/ml的。
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-2-9 15:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位大侠：你们用的过氧化氢都是何种制剂呀？从那个公司买的呀？
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-2-9 15:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问各位战友，有没有取大鼠脑组织，体外培养神经细胞后再制造创伤性脑损伤的模型，以前看过有关的气压，牵拉，机械划伤等模型，但很多都是用胎鼠，如果直接用大鼠的脑组织做，神经元又不具增长生长特性，怎样做模型是不是有可行性，怎么做？谢谢

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据我所知，最好还是用胎鼠来做，因为如果直接用成体大鼠做，很难再体外培养，除非是脑片，因成体大鼠神经元已经交织成网络，形成了很牢固的突触联结而且各种细胞交织，那还怎么做体外培养神经细胞啊。所以成体大鼠体外培养神经细胞后再制造创伤性脑损伤的模型的可行性不大！
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