细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]细胞损伤模型

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]细胞损伤模型

join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
71
 
老年痴呆的动物模型
目前,尽管Alzheimer病(AD)的分子遗传学和分子生物学的研究中发现了4种与AD有关的基因,如APP的突变、AD3、STM2、ApoE等,但导致AD发病的关键机理尚不很清楚,而建立与之互为因果的真正AD模型尤为重要。
本实验采用MR I、γ2刀立体定位射频热凝损毁老年猴脑的穹隆2海马伞,并通过检测其tau及APP蛋白、乙酰胆碱酯酶( acethyl2cholinesterase,AchE) 、胆碱乙酰转移酶( choline acetyltransferas,ChAT)的方法进行验证,为今后研究AD发病机理和有效治疗奠定基础。
材料与方法
1.1 动物 健康的恒河猴5 只,均为雄性,年龄14~16岁;
1.2 方法
1.2.1  仪器及试剂 核磁共振(MR I) 、γ2刀立体定位系统、ASA2601 T射频热凝器(均为以色列ELSCIN公司) ;光学显微镜(Olympus) ;冰冻切片机(Leica) 。抗APPA4 单抗购自德国BoehringerMannheim公司;抗Tau蛋白单抗、抗ChAT单抗购自美国Sigma Chemical Co1ABC试剂盒购自北京中山生物技术公司。
1.2.2 AD动物模型的建立 采用MR I、γ2刀立体定位系统及射频热凝方法毁损猴脑右侧的穹隆2海马伞。
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
72
 
一种新型阿尔茨海默病动物模型的建立

实验动物及分组:
选用健康SD 雄性大鼠32只,体重280~330 g ,将其随机分成A 、B、C、D 4 个组,A 组即对照组,鞘内注射( IT) 生理盐水。
模型组:B 组鞘内注射0. 5 % AlCl3 ,C 组鞘内注射1. 0 % AlCl3 ,D 组鞘内注射1. 5 % AlCl3 ,5 d 后拔管,单笼饲养28 d。

AD 动物模型建立方法及判定
蛛网膜下腔插管及给药方法采用Yaksh 法[ 1 ] 。
AD 动物模型成功标准的判定:采用一次性避暗回避试验行为学测试大鼠近期学习记忆能力,判断AD 模型建立是否成功;病理学观察判断AD 模型建立是否成功。
顶部
join[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72960
精华 0
积分 627
帖子 873
信誉分 100
可用分 5266
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-16
状态 离线
73
 
几种休克动物模型得建立
1.Hypovolemic shock(MODS Multiple organ dysfunction syndrome): 低血容量性休克模型
Wistar大鼠,4. 5 %异戊巴比妥(80 mg/ kg )? 在25 ℃室温下腹腔内给药麻醉?,
右股动脉插入套管针 ,连接多导生理记录仪,监测血压;左颈静脉插入套管针给予甘氨酸、生理盐水和自体血(复苏通路) ;右颈动脉插入套管针,另一端连接肝素化玻璃注射器中, 进行放血诱导休克(休克模型建立)在5min 内使血压下降并维持平均动脉压30~35 mmHg。通过输、抽少量血维持低血压状态55 min。低血压60 min 后用60 %自体血回输5 min 和2 倍回输血量的生理盐水回输55 min 进行复苏。(出血性休克基础上, 通过复苏引发缺血- 再灌注损伤模拟MODS)

2.Septic shock:感染性休克
Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=6),大剂量(LPS10mg/kg)内毒素组(n=9),小剂量(LPS5mg/kg)内毒素组(n=9),对照组注射生理盐水4ml/kg。
戊巴比妥钠(36mg/kg)腹腔注射麻醉,行右侧股动脉插管,连接四导生理记录仪监测平均动脉压(meanarterialpressure,MAP),四肢插皮下电极连接生理记录仪描记心电图并记录心率变化。左侧股静脉注射LPS(注射时间5min),注射LPS前,注射LPS后30,60,90min,2,3,4,6h自左侧股动脉插管采血0.5ml,采血后补等量生理盐水以保证血容量,高速低温离心机3000r/min离心15min,吸取上清保存于-70e冰箱中(TNF测定)
感染性休克目前公认的动物模型有内毒素诱导、细菌注射、腹膜炎模型即盲肠结扎穿孔模型。
内毒素诱导模型具有制模方便、快捷、模型稳定、易于评定等优点,而且动物的血流动力学改变与内毒素的剂量直接相关

3.Cardiogenic shock:(结扎犬冠状动脉左前降支(LAD)复制心源性休克模型)
健康成年杂种犬20只,以戊巴比妥钠30mg·kg-1静脉注射麻醉后,背位固定, 切开颈部皮肤,分离气管后插入插管,连接人工呼吸机。分离右侧颈总动脉,插管,连接AP-601G放大器,测定血压(BP)。于左侧第四肋间施开胸术暴露心脏,剪开心包,做心包术。分离主动脉根部,放置电磁流量计探头,测量主动脉流量(CO)。于冠状动脉左前降支末梢、中部、根部下方,分别用小圆针穿入细丝线,以备结扎。上述手术完成后,稳定15~30min,10mi顺次结扎冠状动脉左前降支末梢、中部、根部,待平均动脉压(MAP)下降至原血压的70%以下,CO减少30%以下者视为休克。如达不到休克指标,再结扎冠脉左回旋支第1、2分支。心源性休克模型复制时间为(124.49±18.42)min,持续观察10min,如血压不回升者进行给药观察。

4.Allergic shock:过敏性休克
健康小白鼠,(变应原)采用鸡蛋清或天花粉8mg/ml并加入等量的氢氧化铝凝胶,氢氧化铝凝胶作为佐剂。 第1日致敏注射:1:2稀释鸡蛋清, 佐剂,皮下注射0.2ml 第15日发敏注射:1:2稀释鸡蛋血清,静脉注射0.5ml 小白鼠发敏注射半分钟至数分钟后即出现呼吸急促,抓鼻,不安,耸毛,弓背,继而出现紫绀,呼吸困难, 分钟后逐渐精神萎靡,平衡失调,大小便失禁甚至死亡。但多数小白鼠可在半小时后逐渐恢复正常.

5.Nervonic shock ?神经性休克 没有找到相关得文献
顶部
am10[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76183
精华 0
积分 676
帖子 971
信誉分 100
可用分 5735
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
74
 
在体肝损伤修复模型:
SD大鼠,2-乙酰氨基芴(2-AAF,Sigma公司产品)20mg/kg灌胃,每日1次,连续4d,第5日在戊巴比妥全身麻醉下行三分之二肝切除(手术当日不灌喂2-AAF),第6日继续灌喂,连续1周。
首先2-AAF持续有力地抑制肝细胞增殖,随后肝大部切除诱导强烈再生需要,导致深层次的肝脏干细胞得以增殖分化发挥修复作用。
(陈耀凯等,中华肝脏病杂志,2002,10:185-188)
顶部
am10[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76183
精华 0
积分 676
帖子 971
信誉分 100
可用分 5735
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
75
 
我以前做培养心肌细胞凋亡模型是用H2O2,SIGMA公司的,用终浓度0.1%,实验很成功的,可以看到凋亡细胞的特征性改变。

====================================================

能否告知,您具体用多大浓度,多长时间来处理细胞的。谢谢了!
顶部
hot_hot_hot[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76450
精华 0
积分 389
帖子 498
信誉分 100
可用分 3247
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
76
 

评价一下离体模型:

离体模型具有许多整体动物模型所不具备的优点:
①可对活细胞进行观察;
②实验条件标准化;
③研究样本较均一,减少了个体差异的干扰;
④便于观察、检测和记录研究的内容,利用离体模型研究者可以运用更多的技术检测更多的指标;
⑤制作离体模型的费用相对较少。离体模型有可能在同一时期利用较少的动物提供大量条件相同、性状相似的实验标本,因而比整体动物模型经济的多;
⑥来源于人体的离体标本相对而言较为容易获得。
顶部
BOSS2011[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74568
精华 0
积分 427
帖子 534
信誉分 100
可用分 3476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
77
 
H2O2是引起细胞凋亡或坏死主要取决于:1过氧化氢的浓度;2过氧化氢作用的时间。一般来说,低浓度的过氧化氢多引起细胞的凋亡,而高浓度的过氧化氢多引起细胞的坏死。在非常低的浓度下,过氧化氢亦可引起细胞的增殖反应,这需要在具体试验中去摸索!
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
78
 
参考文献上说H2O2可以诱导凋亡,我用的是NEK52E,已经试过两次了,浓度设置是1-5mM,作用时间是1-2h.1h后观察,H2O25mM的细胞大片坏死,1mM细胞形态学也发生改变,细胞体积增大,很像坏死,用DAPI染色观察凋亡不明显(我照相了,等我拷过来就发上让大家看看).
我想再试验一下,调整一下过氧化氢的浓度和作用时间,再就是用DAPI染色没法区分坏死和凋亡,可能要换一下方法.
很希望与大家交流!

==============================================================================================================

我不清楚你用的什么细胞,但是我觉得你的双氧水浓度有点大,我在成纤维细胞上用的浓度是0.2mM,细胞存活率大概在70%,只是一点建议。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
79
 
再补充一点,作用2到3个小时
顶部
redbutterfly[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76433
精华 0
积分 701
帖子 1102
信誉分 100
可用分 6281
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
80
 

求助周围神经元培养后的损伤模型的制作方法
顶部