[求助]我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何 - 经验共享

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标题:[求助]我的SD大鼠MSC（骨髓间充质干细胞）状态如何

utt0989[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到了一样的情况
PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦传代细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了 , 你现在的还好吗, /

还有你是否也注意到, RAT 的MSC培养时会出现多核的大细胞里面常包含好几个折光度略低的小细胞 ??/ 我每次都见得到, 是不是我还是那里做的不对?

都好久了, 细胞还是养不好闹心 !!! 就是不知道错在哪里 ??

@STAR@[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

感谢以上几位群友的热心帮助和悉心指教，现在继续上传第四SD大鼠MSC第三天照片，请各位战友继续关注我们的帖子，非常感谢大家的支持！

附件

2012-2-10 15:10

27998313.snap.jpg (51.44 KB)

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发表于 2012-2-10 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到了一样的情况
PRIMARY CULTURE 还可以 , 一旦传代细胞就变得老大 , 都不识FIBROBLASTELIKED 了
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考虑可能为细胞老化的缘故，建议：
1.培养方法的选择：全骨髓贴壁法方法简便易行。
2.培养基的选择：低糖型DMEM或者低糖型DMEM-1640，胎牛血清建议使用进胎牛口血清,如Hyclone 或Gibico；浓度为10％。PH值最好在7.2左右，最好稍偏酸。培养基最好是新鲜配置的。
3.首次换液的时间：我的是48h后换液。
4..首次传代的问题：消化酶用量不要太多，特别是首次消化的时候，以免损伤细胞，影响其活力。消化的时间不能太久。另外首次传代的时间的不要求细胞都长得很满，可能只要是集落长得比较满的话可以传代，一般长满70％左右就可以传代。一般是6-10天左右，传代的时候如果细胞的浓度不够的话可以2：1传代。
5..接种细胞的密度问题：细胞接种密度以大于10的五次方为宜。

orangecake[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激

pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好！我最近才培养骨髓间充质干细胞，请叫一下您的SD大鼠用的是多少克的，还有您使用什么方法来分离培养骨髓干的？我是新手，之前用percoll分离的方法都没有养出来，希望您能指点一下！不胜感激

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我们一般使用100--120g的，股骨比较容易分离，贴壁细胞也更多....你可以试试看

薄荷侠[使用道具]
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发表于 2012-2-10 15:11 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好，请问一下楼主，你取原代细胞的时候，是一根大鼠股骨的细胞种到一个25cm^2的培养瓶里面的吗？我感觉你的细胞养的挺好的，我的里面杂细胞较多，我在想是不是我原代接种密度的问题。非常感谢你的帮助！

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