小中大这我也听过这种说法，也试过，但是不把冻存液洗干净，细胞好像就不爱帖壁，至少我的细胞是这样的。我是用鼠胚成纤维细胞试过。
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前脂肪细胞的培养现在多用于软组织工程和减肥药物的研发。不知你是想向哪个方向研究。对于你的问题，我知道的可以告诉你答案：
1、我的经验是五六代以后就增殖力不行了。但是我查文献，看到米国有个牛实验室，一气儿传了二百多代，看他们的实验方法和我也差不多，不知道诀窍在哪里。那篇文章一时找不到了，找到再给你看吧。
2、我是用胰酶消化法。发现内皮细胞污染后，用胰酶和EDTA消化。镜下观察。内皮细胞消化很快，大约一分钟后就可以看细胞缩小，这里把内皮细胞吹下即可。
3、IBMX是甲基异丁基次黄嘌呤。我是在sigma订的，贵，900多100mg。它的作用是促使脂肪细胞分化基因重排。
4、对，这样也可以。其它供参考的指标有：油红O，GPDH，PPAR等。
5、大约一千万左右吧
6、我共计花了二三千块：包括，IBMX 900，胰岛素，T3、转铁蛋白，共计一千多，胶原酶300多，还有就是几只大鼠啦，每只25(8过这笔钱你就不用啦)，再算上那些一次性培养瓶什么的，精打细算三千可以搞定。
