细胞世界

还有请教各位是离心率的事，有的文献上写的是500g或是800g，而有的写的是1000rpm，这两者在司徒镇强老师的细胞培养书的附录上相对比，发现在500g或是800g的转速应该在2500-3000rpm,不知各位何看待这事，有什么经验给指点一二。谢谢先。

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500g或是800g的转速应该在2500-3000rpm,不是把，g和rpm得换算，应该 有 半径，文献上又没写半径，你怎么能通过 g换算成rpm.我 也 不 太懂 ，还是 高人指点吧

还有请教各位是离心率的事，有的文献上写的是500g或是800g，而有的写的是1000rpm，这两者在司徒镇强老师的细胞培养书的附录上相对比，发现在500g或是800g的转速应该在2500-3000rpm,不知各位何看待这事，有什么经验给指点一二。谢谢先。

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1000RPM就行了，太高细胞可能会受影响。

你是如何检测3-GDPH的？能否给予详细的步骤及所需试剂，有无检测GDPH的试剂盒？
PPAR是什么？

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日本的takara公司有试剂盒

我养过，但是是大鼠的，我的实验方法如下：
实验方法：
1．大鼠前脂肪细胞的原代培养：颈椎脱臼法处死大鼠，75%酒精浸泡消毒15min，切取皮下脂肪组织约10g。Hanks液洗涤，分离去除脂肪组织中肉眼可见的纤维成份及血管。剪碎成约2mm×2mm的小块，加入消化液，置37℃，空气摇床100rpm消化。2hr后，1000rpm离心5min，去除漂浮的脂肪细胞及培养液，沉积的细胞用红细胞裂解液再次配成细胞悬液，37℃孵育10min，以去除污染的红细胞，150μ尼龙网过滤，Hanks液洗涤并离心2次，每次1000rpm,5min。沉积的细胞用培养基A制成细胞悬液，调节浓度2×105/ml接种于培养瓶中。置37℃，体积分数5%CO2培养箱内孵育72hr后，细胞换液，一周以后可以传代。

2.细胞的分化：细胞贴壁72hr后Hanks轻轻洗去培养瓶内未粘附的物质，换用培养基C诱导和维持脂肪细胞分化，3d以后更换为培养基B，以后每三天换一次液。

培养基A（增殖培养基）： DMEM/F12　11.2g/L
10%小牛血清,
L-Glutamin 0.35g/L
Hepes 15mmol/L
NaHCO3 15mmol/L
青霉素 100U/ml
链霉素 100ug/ml

培养基B（诱脂培养基1）：DMEM/F12　11.2g/L
NaHCO3 15mmol/L
Hepes 15mmol/L
泛酸盐 17µmol/L
生物素 33µmol/L
人转铁蛋白 17µmol/L
青霉素 100U/ml
链霉素 100ug/ml
氢化可的松 100nmol/L
胰岛素 60nmol/L
T3 0.2nmol/L

培养基C（诱脂培养基2）：DMEM/F12　11.2g/L
10%小牛血清,
IBMX 0.25mmol/L
L-Glutamin 0.35g/L
Hepes 15mmol/L
NaHCO3 15mmol/L
青霉素 100U/ml
链霉素 100ug/ml
0.22µm过滤除菌，-20℃保存。

消化液：胶原酶Ⅰ　　 150mg
　　 牛血清白蛋白　　2g
0.01M的PBS定容至100ml

2.2红细胞裂解液：EDTA 0.1 mM
　　　　　　 NH4Cl　　 150mM
　　　 K2HPO4 5.7mM
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请问为什么要加 泛酸盐 17µmol/L
生物素 33µmol/L？
谢谢！

1000RPM就行了，太高细胞可能会受影响

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我们在做前脂肪细胞的培养，按照公式计算下来，大概需要2500－2600转，培养了大概有六回了，没有觉得有什么太大的影响，细胞还好。但是我们师哥是用1000转离心的，没有培养出来前脂肪细胞，我象大概和离心有关吧

用“脂肪细胞”搜索一下试试。可以和相关的人私下联系请教，没有要的资料也可以将你的问题发新帖提问