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标题:[求助]兴奋性氨基酸对神经细胞的损伤

lagua123[使用道具]
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发表于 2012-2-12 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢。我现在谷氨酸溶解还是有问题，请大家帮忙!我分别用PBS，DMSO和乙醇配置，用PBS配置，并调PH至7.0,虽然谷氨酸溶了,但却没有发现明显的细胞毒性,而它在后两种溶剂中的溶解度也不是很大,要达到0.1%很困难,只能到0.5%,而我除了加谷氨酸外还要加检测药物(也是用DMSO)溶解,这样培养液中的DMSO的终浓度太大,影响实验结果.请大家帮我!非常感谢!
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-2-12 14:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好！
前些天我也在为谷氨酸的溶解发愁，经查阅文献终于找到了溶解谷氨酸的方法。
谷氨酸是一种亲水的酸性氨基酸，其等电点为3.08，溶解度为0.86g/100ml,称量0.86g谷氨酸溶解在100ml 双蒸水中，磁力搅拌器搅拌，25度水浴，即可溶解。
但我不知道这样溶解的谷氨酸是否具有明显的细胞毒性。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-2-12 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢。按照你的方法我配了谷氨酸溶液，但是没有明显的细胞毒，很困惑。 难道是我调PH值出了问题。因为想测谷氨酸对细胞的毒性，所以尽可能排除由于PH的改变对细胞的影响，所以每次都将PH调至中性，然后加到培养液中。不知道园中有没有做过这方面的战友，希望能给我指点迷津，非常感谢！
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发表于 2012-2-12 14:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是想测药物对Glu对细胞的损伤保护作用，我是把3.8mg的L-Glutamine acid（上海产）直接加入无血清培养液的，然后过滤除菌，终浓度是500微摩/L，但是第一次实验模型组就没有出结果，我还以为是国产Glu的问题呢。今天到这里一看，才知道还有Glu的配制问题呢。楼上的妹妹，你现在有办法了吗？别忘了告诉我一声，谢谢！

你是怎么配的？能告诉我吗？是不是我没有加甘氨酸的原因呢？该加多少甘氨基酸？你测定什么指标来说明？
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 小中大
我也想早点知道呢，看有文献说加10微摩/升的甘氨酸，是不是这样啊。
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发表于 2012-2-12 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是想测药物对Glu对细胞的损伤保护作用，我是把3.8mg的L-Glutamine acid（上海产）直接加入无血清培养液的，然后过滤除菌，终浓度是500微摩/L，但是第一次实验模型组就没有出结果，我还以为是国产Glu的问题呢。今天到这里一看，才知道还有Glu的配制问题呢。楼上的妹妹，你现在有办法了吗？别忘了告诉我一声，谢谢！

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谢谢，按照你的方法我配了谷氨酸溶液，但是没有明显的细胞毒，很困惑。 难道是我调PH值出了问题。因为想测谷氨酸对细胞的毒性，所以尽可能排除由于PH的改变对细胞的影响，所以每次都将PH调至中性，然后加到培养液中。不知道园中有没有做过这方面的战友，希望能给我指点迷津，非常感谢！

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呵呵～～～

你们用的是什么细胞呀，如果是海马神经元，应该效果十分明显（因为海马神经元的GluR表达很高），但是如果是其他细胞，他们没有或较少表达GluR，那么对Glu的敏感性就不是很高！

如果不知道细胞有没有GluR表达，最好的方法就是用细胞免疫化学的方法染色一下。
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发表于 2012-2-12 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以确定是有的，因为别人都出文章了。还是上次问的PC12
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发表于 2012-2-12 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以确定是有的，因为别人都出文章了。还是上次问的PC12

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您的PC12细胞是怎样处理的？？处于什么状态？

如果可能还是应该作一下GluR的免疫细胞化学染色！
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-2-12 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PC12只表达痕量GluR，用谷氨酸处理是想模拟一种氧化应激损伤。因为谷氨酸和胱氨酸在细胞中有共同的转运体，所以，胞外高浓度的谷氨酸会抑制胱氨酸的摄入，从而使胞内GSH合成受到抑制 ，影响胞内抗氧化酶的水平，引起细胞损伤。
hwb，如果你选用的也是PC12,加不加甘氨酸应该不是主要问题。我配置谷氨酸溶液就是把谷氨酸溶于PBS中，调PH至中性，然后加到培养基中到所需浓度。但毒性与文献上的差异较大。我现在也在怀疑是不是国产试剂有问题？
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发表于 2012-2-12 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

GLU是易溶于水的，所以配制的问题应该不是问题，我想没有那么复杂吧。

astra,你加甘氨酸了吗？谷氨酸与受体结合必须有甘氨酸参与才行呀。你也是用的PC12吗？

你用的浓度是多大呢？我还看到有10毫摩尔大的呢，要不咱试试？
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