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最近做过些细胞活性的测定,用过MTT,也用过CCK-8,有些心得,也有疑问。先说说心得吧:
MTT:步骤有点烦琐,中间有吸液的步骤会造成不可避免发误差,特别是加DMOS前的一步,会吸走不少的结晶,后来改进了方法,用2%SDS-HCL溶结晶,不需要去培养基,但是必须37度过夜,耗时比较长。另外MTT反应,这一步,至少需要3小时,如果要做某个药物的急性作用,用这个方法就不太好了。
CCK-8:是MTT的改进,步骤简单,中间不需要吸出孔内的培养基,这样就减小了误差,另外CCK-8反应时间也短,最短1个小时就够了,特别适合做急性作用。缺点是,有点贵。
我的疑问是:
1.不管是MTT还是CCK-8,原理基本是一样的,都是发生反应生成有色物,只不过一个是难溶于水的晶体,一个是直接溶于水的。我的问题是,如果做急性作用,是不是可以再缩短反应时间(当然OD值不能太小)?比如,缩短至半小时?另外,最后所测得OD值应该是MTT或CCK-8反应时间内细胞活性的综合反映吧?
2.平行孔的OD值,最科学的分析方法是怎样的? 有的人把平行孔相差很大的值去掉,只保留比较接近的值,理由是:相差很大的值,很可能是操作带来的较大的误差,不可信。我个人觉得,这样做不科学,但是也找不到很好的解决办法。还希望各位给点意见。多谢!