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标题:[讨论帖]细胞活性测定方法专题讨论

xingyi08[使用道具]
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发表于 2012-2-13 13:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教：悬浮细胞怎么做MTT，一定要离心吗？离心的速率是多少？请教孔板怎么离心？新手还是实验准备阶段，望大家不吝赐教！！
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langlang[使用道具]
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发表于 2012-2-13 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做MTT 做了很多，现将一些体会与大家讨论：
1.结合本实验条件，摸出最佳培养时间。
2.设置复孔最少3，有梯度最好，这样才科研精神！
3.结果重现性差？主要是因为不一致，体现在1.没有合适的对照或没有对照。2.培养时间、加入mtt时间不一致或mtt作用时间相差太大3.出现紫色结晶后，加入dmso后，微型摇床作用时间不一致，最好是结晶完全溶解。
4.尽量减少影响因素（如：mtt配置的方法，溶解剂等。
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langlang[使用道具]
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发表于 2012-2-13 13:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教：悬浮细胞怎么做MTT，一定要离心吗？离心的速率是多少？请教孔板怎么离心？
答：这要看你的悬浮细胞中残存的培养基是不是对你的实验有很大影响， 一 般你可以更换培养皿就可以避免因离心造成的不必要的细胞丢失。
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发表于 2012-2-13 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近做了几次MTT,结果很不理想,感觉是干扰因素太多.加药作用后再加MTT，细胞量少的孔显色倒深都成紫色了,可能是药物的影响。后来我在药物作用后用不含血清的培养液洗了两次，再加MTT，结果依然这样。酶标仪测的结果跟显微镜下观察的结果正好相反 。肯请各位做过MTT实验的前辈指点。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2012-2-13 13:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是测定细胞在一段时间内的活性，则可以用微量热法，直接监测细胞代谢的热效应。代谢活性强则当然放热量大。可以定量表示为细胞的代谢焓变，甚至可以计算出单个细胞的代谢焓变，测定精度高，重现性好。不过这个方法需要微量热仪，最便宜的也要30多万，贵的100-200万。
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redbutterfly[使用道具]
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发表于 2012-2-13 13:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做MTT来测定药物对肿瘤细胞的作用,发现药物浓度越高OD值也越高,不得其解,而在显微镜下明明看到药物浓度高的细胞形状明显改变,请高手们多多指点迷津.
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发表于 2012-2-13 13:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
总感觉MTT法存在太多的误差。可能是因为我还没掌握要领吧。

首先有一个问题想请教一下：

对于不同的细胞是不是都要做一个细胞数和OD值的线性曲线，具体实验方法，哪位有文献可以上传吗？

细胞中加完药物3天-5天后取样，这期间培养液会变黄，因为细胞仍在生长，但些时也没有办法去补培养液，除非补加含相同药物浓度的培养基，不知大家是怎样做的。如不补加培养液，细胞会因为营养不充分而部分死亡，当然阳性对照也是这样，不知这对实验会不会有不可接受的影响？

加完MTT，4小时后需将MTT吸走，再加入DMSO，该步骤极易将形成的结晶吸走，有没有好的办法，我只能用MTT。

想研究病毒、药物的协同作用，大家在实验设计上是否有好的办法。做了几个月实验，感觉没什么收获。狂郁闷·
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发表于 2012-2-13 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上的问题也是偶想知道的，
1）在做MTT之前是否需要做每一种细胞的生长曲线？？？
2）使用MTT法筛选药物对肿瘤细胞的抑制作用，在药物与细胞作用结束之后，是否需要将药物连同培养基吸除，再加入新鲜培养基培养24h后再加入MTT液测量呢？有人说这样可以评价细胞的增殖能力，但很可能细胞在培养一天后也就长到了与对照组差不多的状态。
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发表于 2012-2-13 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是遇到这个问题,发觉药物作用过的细胞OD值比对照的要高,但在光镜下看到药物作用过的细胞明显变少好多,唉,百思不得其解,请各位高手指点迷津!
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2012-2-13 14:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我曾经尝试过用PBS稀释CCK-8, 好象效果不如用培养基稀释好. 怕培养液对读数有影响,可以做空白对照.
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