小中大我不知你提这个问题是不是看了司徙先生的《细胞培养》一书中关于MTT试验的方法,因为它上面是要求先做这些,但这本书 上就介绍了这几个参数的测定方法。
另外,我也是准备做MTT,我在站内找了很多关于MTT试验的贴子,还有就是司徙先生的《细胞培养》一书,看后还是有些困惑:1.关于空白对照孔(兼调零孔)加液,书上和一部分人说是只加培养基,也有和我一样理解为应加培养基、MTT、DMSO,一起相同步骤后对照,从我预试验的情况看,培养基(我的是DMEM/F12)是红带黄色的,而加了DMSO后的试验孔的液体是呈蓝色,我想两种明显颜色不同的液体怎能设为对照?所以我理解空白对照(兼调零孔)应为一同加入MTT,DMSO;2.对于测定波长,为什么不同的资料会没个一致的看法:书上说是490、Roche公司(ATCC公司也是)产品说明上说是550-600/>650,还有说是570/630(nm),我预试验的情况是用490/630nm,结果对照兼调零孔的值比试验孔的还高!
再有,看了这楼战友的高见,我想改用CCK-8了,我养 的是星形胶质细胞。
希望高手指点一二。
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1,我觉得空白加不加培养基,主要看你的培养基对最后的数值影响大不大,我门用的1640,加了之后和只加DMSO,MTT的OD值差的并不 多,而且我觉得最后你的所有值都要减去这个空白对照,所以影响应该不是很大吧.
2,我们用的酶标仪#3的时候就是490nm#4的时候是630nm,我们一直都 是用#3
我觉得#4肯定不行吧,差太远了!你的结果"对照兼调零孔的值比试验孔的还高"是不是因为你倒MTT的时候把细胞都倒掉了??或者其他原因??