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标题:[讨论帖]我的实验成长日记

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11
 

后来做了一下细胞计数,细胞大约为5*10^5/ml,应该说细胞接种的密度绝对是够的。
有一点无可奈何。
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gemei0115[使用道具]
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原因可能有:
1 细胞消化过之后,吹打用力过渡,可能已经将部分细胞吹打死了。因为你说吹打了100次左右了。刚开始作细胞的时候总是害怕细胞被消化过渡,所以有很多新手都是刚看到细胞收缩就终止消化,这样往往容易造成用很大的力量吹打才能将细胞吹下来,用的力量 过大就会容易造成细胞的死亡。
2 不要全部用他的培养液,半量添加他的培养液。细胞在新的环境中有个适应的过程,在你的培养环境中,逐渐换成你的培养液,也不要全部用他的,毕竟细胞要进行代谢,代谢中存在一些有益的,但也有害的物质。
祝实验顺利
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DNA[使用道具]
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现在我是一心一意的等待着细胞状态转好了,希望可以平安度过这一段时期。我以为养细胞,换液体,传代还是很简单的事情,却想不到自己只是形似而达不到神似。还是需要在实践中不断的积累经验。别人的经验告诉你了,知道了,可是还是会犯错。只能不断的提醒自己,犯错了能够弥补并且积极改正才好。
谢谢nobelli的分析,对我很有帮助。
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昨日我仔细研究了一下细胞传代的方法,我发现胰蛋白酶消化后,细胞轻轻拍打下来然后吹打成单细胞溶液就可以了,现在看到细胞没有消化下来就放到培养箱中,稍稍拧松瓶盖,过2-3分钟再拍打一下,细胞成片掉下来再加入培养液终止消化,吹打成单个细胞悬液即可。
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kewanqi2011[使用道具]
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我也是刚进实验室的新手,花了两个星期洗瓶子,配液,现在前期工作已经准备的差不多了,就等着养细胞了,可偏偏碰上十一(我养原代),病房手术量骤减,早知道就事先取点标本了,那现在就差不多可以养上了。现在在等待中,心情很激动,但自己没有经验,以后还要多上来跟前辈们学习,多多交流,共同进步,希望大家的细胞都能长的棒棒的
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dongdongqiang[使用道具]
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我觉得你那位师姐说得对:在细胞传代过程中应该在制成细胞悬液后离心后去掉上清液,然后再加入新鲜的培养基制成细胞悬液,这样才能够彻底终止胰蛋白酶的作用。
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fei1226com[使用道具]
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楼上的,一般没有必要那么繁琐的。一般加入培养基之后,血清中所含有的物质足够终止消化的了。
慢慢来,不要着急。第一次做嘛,难免的
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911[使用道具]
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18
 
我的细胞养了3个月了,但一直没有养好,经过数十次的失败,总结出一点自己的体会,与大家分享。
1、做细胞培养,任何事情都要身体力行,绝不能让别人代劳,因为细胞培养受太多的不确定因素的影响。
2、规范操作,这是做细胞培养的基本功,没有规范的实验操作,很难养好细胞。
3、以上两点,我想大多数同道都能做到,但有一点是我们常常忽略的,那就是对一切都要持怀疑的态度。当细胞培养失败时,任何因素都值得怀疑,尤其看似正常的东西,只有如此,才可能尽快找出失败的原因。
以下是我在养细胞时的两次失败总结:
1、刚开始养细胞时,培养液的PH值总是通过酚红指示剂的颜色和PH试纸来粗略判断,但细胞总养不好,后来我用PH计测正红色的培养液,发现PH值高达8.4,此事告诉我,培养液的酸碱度绝不能仅仅通过颜色或PH试纸来简单判断,最好用标准PH计测,配好的培养液,一周后若颜色无明显变化,可用试纸简单测一下,若有较明显变化,最好再次用PH计测,以免影响细胞生长。
2、最近,我养的细胞总是碎片很多,并且不出一周,细胞就大都死亡了,经多次调整,但始终未找出原因,肉眼观察已培养3天的细胞培养液,仍透亮清澈,但今天我用高倍视镜观察,发现细胞是被污染致死。此事再次告诉我,做细胞培养,当失败时,你可以怀疑任何因素,除你想到的可能失误外,尤其还要考虑那些看似正常的因素,往往原因就在其中。
以上两点是我的一点体会,写出来供同行交流学习,谢谢!!
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怎么用高倍镜看出来细胞被污染?
最近养细胞浮起来的很多,也不知道是什么原因,现在血清加至20%,又用了一些胰岛素,不知道状态能不能转好。
不知道有同仁买过来的细胞就状态很差的时候怎么处理的?有抢救过来的细胞吗?
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DNA[使用道具]
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今天看到同一个实验室的细胞污染了,镜下很多活动的杆状细菌,真的很可怕呢。原因是使用超净台的时候忘了打开层流。暗中庆幸我的细胞没有被污染过
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