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标题:[求助]3T3-L1诱导分化遇到困难!

tudou85[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问楼上，你这张图片是第几天，八天？
另外ins 我也用水溶过，但是融解效果不是很好，所以换成DMSO了！
其实分化剂的使用，主要也和细胞状态有关，我还用ins IBMX dex 诱导过四天，每两天换液！效果也还行！
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
群友，你的照片好漂亮。请问你配试剂时,IBMX和insulin用水溶解，DEX用酒精溶解，你使用的浓度多大？配成多少浓度的母液？是否过滤？ins用水配不易溶，能否加盐酸助溶？要培养几天才能出现你照片上的效果？急需帮助，谢谢！
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dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外还有个问题就是，你们的细胞大慨传了多少代，听园子里的人说，3T3-L1传到20代就不分化了，有这回事吗？期盼回复！
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woshituzhu[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也听说T3T－L1传代数有限，不知道是真的假的！
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3T3-L1 超过20代基本就很难分化出来了，我一般做到17－18代就不要了。
我这张照片是第八天的照片，
insulin用水比较好溶解，IBMX用水不容易溶解，要加入很少量的KOH助溶。
insulin和IBMX用水配所以要过滤，DEX就没必要了。
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plaa[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
“3T3-L1 超过20代基本就很难分化出来了” 有没有什么依据？为什么超过20代就分化不了？
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发表于 2012-2-18 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

属于个人经验，没什么特别的依据，据我所知道的实验室，都没有20代后还能分化得很好的，当然这是我个人的看法，不一定正确啊。因为分化的时间和成本都很高，所以大家都不愿意冒这个风险，也可能是原因之一吧。但我以前分化时，到20代左右就 不太行了。
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发表于 2012-2-18 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢答复，那么你们的细胞是不是冻了一大批，到诱导分化时再复苏，这样

是不是很麻烦，因为有个细胞冻存、复苏过程，复苏不好很容易失败。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对的，我们的细胞最初代数少的时候冻了一批。复苏也不困难啊，就和别的细胞一样就可以了，我一般是手上的细胞传到15代时就开始复苏新的细胞，这样实验就不用停下来等细胞了。
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plaa[使用道具]
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发表于 2012-2-18 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知你的细胞是冻在液氮中还是低温冰箱中，我们的细胞放在低温冰箱中冻，但过了3个月后，复苏很难成功，液氮中也许还好一点，但液氮需定期灌取，比较麻烦，弄不好液氮挥发了，细胞就呜呼了！
希望能够给个联系方式，希望和你能够交流交流！最近细胞分化不了，很是郁闷！
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