小中大根据我的经验,提供以下几点参考意见:
1,一定要在细胞状态好的情况下诱导分化,3T3-L1长得非常快,如果长满以后不换液,会有大批细胞死亡,判断细胞好坏的标准是cell confluent 后,培养基中很少有漂浮的死亡细胞。所以诱导前传代的细胞在接种时数量不要太大,最好在10*4数量级,这样让细胞长3天后铺满,再换液,再让细胞长2-3天,这时的细胞会退出生长周期,进入growth arrest状态。
2,IBMX的溶解方法有多种,不同文献有不同方法,DMSO,乙醇,浓盐酸,KOH溶液都可,针对你所说的出现结晶问题建议你用1M KOH试试,即0.0115 gIBMX + 940 ul ddh H2O + 60 ul KOH,
3,胰岛素浓度大一点只会促进分化,不会有抑制作用,因为Preadiopocyte细胞膜上胰岛素受体很少,所以需加超过生理浓度的insulin,以其激活细胞膜上的IGF1受体,通过IGF1通路来诱导分化。