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标题:[求助]transwell 做体外侵袭实验膜上没有细胞

jrwyyplt[使用道具]
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请问楼上,你用的条件培养液是什么?加趋化因子了吗?膜下面有没有涂Fn?
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redbutterfly[使用道具]
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急~~~
transwell实验怎么都做不出来,没有细胞到小室外膜。请高人指教啊!
我前几次都没有做出来,我最近做了一次没有加胶的,直接加细胞,上室用无血清培养基悬浮细胞,细胞数量为 10^5。下室的诱导因子为 40%的胎牛血清培养基,孵育24小时后看到下室有百来个细胞,但小室的外膜上就是没有细胞。内室用棉签一擦细胞全没有了,不知到什么原因啊!急死人啦。。。。
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吴才子[使用道具]
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millipore公司有12微米的我刚定了100个
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吴才子[使用道具]
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我现在还没定matrigel BD公司有 但想问各位搂主他的浓度是多少(...mg/ml) 我要每膜100微克 说明书上没说但matrigel 铺的的厚度说可以是0.5--10mm.
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redbutterfly[使用道具]
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BD公司的胶是12mg/5ml
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回复 #15 redbutterfly 的帖子

BD公司的Matrigel应该是是9mg/5ml吧!
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mimili_901[使用道具]
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我也在做侵袭实验,遇到的问题很相似,就是擦胶的时候会发现,稍一用力,就会把细胞完全擦掉,不知道楼主后来是怎么解决这个问题的呢?有没有什么比较好的,擦胶的方法
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分子式[使用道具]
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18
 

我用的sigma的ECM,稀释两倍,共50u。8h就很多细胞传过去了。1*10e5. 我准备加大细胞量,这样穿过去的细胞就少一点(不过一直想不通为什么细胞数越少反而穿过去越多?)
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