小中大请问你做过小鼠脾淋巴 细胞的分离吗？为什么我加了红细胞裂解后，离心后试管底下剩下蛋白胨样物质？淋巴细胞不见了？
小鼠的脾淋巴细胞非常好分的。因为其中细胞成分不象血液中那么复杂，还有很多凝血因子。离心后试管底下剩下蛋白胨样物质，一般在分PBMC时较常见，估计是一些可溶性蛋白形成的。即使有它们，依然是可以分离到细胞的。个人感觉用不加血清的培养液分离时效果好，虽然费一点但细胞死亡少，较少出现蛋白胨样物质。
使用小鼠淋巴细胞分离液分离出来的细胞就比较多，如果不用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，直接用红细胞裂解液分离的细胞更多，分离时脾细胞悬液制备很重要
小鼠脾细胞悬液制备
1． 小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡3分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；
2． 在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；
3． 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏。放入盛有5ml Hanks 液的培养皿中；
4． A：梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降5分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞；
B：钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，用注射器针芯轻轻研压脾脏，获细胞悬液；
C：酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入400 u/ml胶原酶（III型）5ml/只脾脏，37度消化20分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。
B法细胞得率高，很多文献用它，C法没试过
