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标题:[讨论帖]MTT&淋巴细胞增殖

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

MTT 测的吸光度值太低, 只有0.1以下
不知道该怎么做下去
有哪位大哥大姐知道B淋巴细胞増殖怎么做啊
细胞数是多少?
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idea2011[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼主你好 ！小妹我也在做增值试验 ，出现了很大的问题 ，刚分离的淋巴细胞存活率>95%，种在96孔板中 ，每孔50万个，结果十个小时后没有发现细胞增殖现象 ，而且看起来死了好多，为什么?
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

想请教楼主的实验方案是如何设计的?
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BUK[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在正在做淋巴细胞的MTT，想问一下大家培养的淋巴细胞一般都存活几天啊？是不是提出来之后就要接到96孔板中刺激啊？
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TAT[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

淋巴细胞是1.0~4.8*10E6, 单核细胞>8.0*10E5
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baidukk[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
淋巴细胞增殖时每孔加多少个细胞比较合适啊？还有一个问题就是如果我想刺激细胞20小时，那我是应该在20小时的时候加mtt 还是在16小时的时候加mtt？谢谢了！这个问题困扰我很久了，一直没有找到答案。
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主好，我也想做淋巴细胞增殖，细胞从小鼠身上获得。我现在的问题是最想做T细胞的增殖，不知道最好是哪个部位获得细胞，胸腺、脾脏、血液？
还有获得细胞后如何鉴定纯度？培养后如何鉴定增殖活性？什么方法比MTT法可信度更大？
您有没有做淋巴细胞的分化，是测定的哪些指标？

我的问题太多不好意思，因为我原来不是学医的，对这方面了解有限。希望楼主能把你的实验方案传授一二，不胜感激！
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vera+[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问有做过CD4+T细胞增殖实验的吗？能否说说您的详细步骤及结果。Thanks a lot！
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发表于 2012-2-22 12:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你好
做淋巴细胞增殖实验时如果没有96孔板离心机，可以用其他方法进行操作吗？
谢谢
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Ao7[使用道具]
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发表于 2012-2-22 12:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在此，我在补充说明一些注意事项，如果能对您的实验有所帮助，不胜欣慰~

1.如果大鼠的淋巴细胞刺激失败，请用小鼠。大鼠真的不好做……
2.请一定保持细胞的活力，冰上分离淋巴细胞~
3.ConA的质量很重要，剂量次之，如果您刺激失败而且有条件，请到隔壁实验室借一点试试
4.用进口的枪头吧，国产枪头毛刺很多的，剧烈吹打很容易造成细胞损伤
5.脾脏淋巴细胞中只含有30%的T细胞，而ConA只能刺激T细胞增殖，所以，请增加细胞浓度……
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