小中大本实验室细胞培养系统5年来未发生重大污染细菌或其他大事故，关键在于成熟而严格的细胞培养操作规范，在此特别提醒战友们注意设备维护（也是与以上战友不同之处），还有很多细节不能一一叙述，欢迎提问：
无菌操作注意事项
1.进入无菌室应脱掉外套和鞋子，换上无菌室的隔离衣和拖鞋。
2.进入无菌室的人员不应过多。没有工作和学习任务者应离开无菌室。
3.进行无菌操作前注意先用新洁尔灭洗手套，然后喷淋75%酒精。物品放入超净台前也应先用新洁尔灭擦拭，再喷淋酒精，玻璃制品还应用酒精灯火焰烧烤。
4.用显微镜观察活细胞前，应该用酒精棉球擦洗载物台。如果观察的细胞培养皿、瓶或板较多，将细胞放在超净台内。不可将细胞培养器皿放在没有防护的台面上，以防细菌污染。
5.活细胞进入或离开无菌室，必须进行包装（可用铝箔、灭过菌的报纸），禁止直接运输裸露的培养器皿。如将培养器皿敞开照相或者裸露拿离无菌室后，不得再放入培养箱。
6.工作结束后应清理超净台，用新洁尔灭擦洗台面，将多余物品取出，打开超净台紫外灯。无菌室内的多余物品应及时取走。
7.培养箱内不用或者污染的细胞要及时清理。
8.培养箱的使用请参考二氧化碳培养箱的使用方法与注意事项。
9.水浴锅内添加的水是桶装三级蒸馏水，添加10ml新洁尔灭，每周值日生应更换水和新洁尔灭。
10.配好的培养液应在一个月内用完(冷藏保存)，PBS应不超过一星期（常温保存）。
11.不清楚的问题，应向其他同学请教，不可擅自处理。
二氧化碳培养箱使用方法与注意事项
1．未经维护人员许可，不得调节培养箱、减压器和钢瓶上的任何设置。
2．使用此培养箱者，请认真阅读此说明。
3．培养箱中托盘内必须有水，如果缺水请加入1000ml常温的已经灭菌的蒸馏水，并加入5ml新洁而灭。缺水会导致CO2浓度偏低，损伤细胞。紧急情况下，可用已经灭菌的常温的PBS代替水，在有水后置换掉PBS。严禁使用温度高于37℃的水，否则可能损伤细胞。
4．CO2读数降为0后请立即关掉培养箱电源，并通知维护人员。在37℃，CO2浓度为0时，细胞在大约20小时内全部死亡。在常温下，CO2浓度为0时，细胞在48小时后仍然存活。因此，在无CO2时，应关闭电源，以降低温度，保护细胞。
5．CO2读数为5.0％，温度为37.0℃，减压器低压表为0.03MP，若发现异常请通知维护人员。
6．培养箱的无菌处理：
（1） 每月用新洁而灭（0.1%）擦拭箱内壁和支架一次，每3个月箱内照射紫外线30分钟一次，每年拆除箱内支架包括风扇清洗一次。清洗培养箱时应将细胞转移至超净台，关闭超净台紫外，打开风机。
（2）发现箱内有洒落的培养液后，立即用泡过新洁而灭的抹布擦除。
（3）培养箱内的细胞、无菌实验瓶（皿）应注明使用者姓名、日期，使用期限应不超过7天，否则易长菌。如需超期使用，请提前向值日生说明。值日生有权利和义务检查培养箱内所有的培养器皿，以清除污染源。
维护人员工作参考
1．培养箱的启用
（1）用新洁而灭擦拭箱内壁和支架、风扇
（2）接通电源，设定CO2浓度为5.0，温度37℃，温度应该用高精度温度计校准。参数设置方法请参阅说明书。
（3）在托盘内加1000ml常温的已经灭菌的蒸馏水，并加入5ml新洁而灭
（4）6小时（或更长）后，观察CO2读数是否为0，如果不是0，请将读数设为0。如果读数是0，进行下一步。
（5）接通CO2。
2．CO2减压器和钢瓶的使用
（1）在接收到钢瓶，放在无菌室后，应该用湿抹布将钢瓶外表灰尘擦净。应使用食品级CO2，或高纯级CO2。一般情况下使用食品级CO2就能达到要求，可节约经费。
（2）强力推荐使用上海减压器厂有限公司生成的YQTS-711型双级式CO2减压器，价格约430元，可上网搜索。普通单级减压器在停电后可能会使低压持续上升，造成培养箱胶管爆裂或松脱漏气。
（3）钢瓶的启用：将CO2减压器旋钮逆时针调至无应力的自由旋转状态；将减压器安装在钢瓶上，连接处二者的轴线应该重合（可用左手托住减压器，右手拧紧罗帽），否则易漏气。用扳手拧紧罗帽，如有空间位阻，可暂时拆除钢瓶手动阀，之后重新安装钢瓶手动阀。打开钢瓶阀门，至少要旋转2圈（720°）用肥皂泡检测连接处是否漏气。
（4）启用CO2减压器：顺时针拧动减压器旋钮，使低压表指针上升至0.03MP。在随后的6小时内，低压表压力会持续下降，因此应再次调节旋钮，使之保持在0.03MP。因此应该尽量避免在晚上调节减压器。
（5）工作期间长期监视：随使用时间延长，钢瓶压力（高压表）从约7MP持续下降，这会导致低压表压力持续上升，因此应将低压表压力调低，使之保持在0.03MP。
（6）一瓶气体约用1个月（每天开关门100次左右）-3个月（每天开关门10次左右），如果明显少于此时间，应该检查培养箱内和培养箱外气体管路是否漏气。
