小中大谢谢LZ的经验分享！请教一下，我现在在养luc-hepa1-6(一种小鼠的肝癌细胞系)前段时间养的挺好，最近越养越差，不知lz有没有养过这种细胞，有什么要注意的，谢谢！
现在实验什么都准备好了，就是没有细胞，急啊！我消化时用的是0.25%的胰酶约1-2min，10%的DMEM
“ 请教”不敢当，一起交流。您这种细胞我没养过，但细胞株一般都还是比较好养的。既然前段时间养得挺好，又没有污染，只是状态越来越差，我建议先将血清加到 15%（甚至20%），过段时间细胞长皮实了，再换回10%。同时注意下培养液的pH，而且再急也不要天天去看它，可以隔天看一眼，视具体情况处理就行。细胞拿出培养箱时不要忘了把盖拧紧，放回去时也不要忘了把盖拧松。不要着急，准备工作本来就很费时费力，同时又很重要，真正上实验也就那么一会儿，从复苏细胞到真正做实验花一两个月时间很正常，如果是原代培养更费时间。
不太同意加血清的方法，癌细胞系10%一般已经是比较高了，原来长的很好而后来不太好了，很多情况下与培养条件有关，比如培养瓶，是不是一次性的，如果是，可能这一批质量不够好，如果不是，检查一下是不是瓶清洗的不好，如里面是否有残存的细胞渣，或流水清洗不充分；再比如是否是新换的一批培养基，尤其是否新换血清了，这种情况比较多见，如果是建议换一批好点的血清，等等，应该多找找这些方面的原因。再有一种情况就是是否有支原体或酵母菌污染。
